刺参体腔液蛋白质双向电泳体系的建立及优化

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.2013-3218

中国农学通报 ›› 2014, Vol. 30 ›› Issue (14): 39-45.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.2013-3218

所属专题：生物技术

刺参体腔液蛋白质双向电泳体系的建立及优化

梁学旺田燚湛垚垚常亚青

收稿日期:2013-12-09 修回日期:2014-03-13 出版日期:2014-05-15 发布日期:2014-05-15
基金资助:
国家自然科学基金项目“刺参盐度调控基因的筛选及功能验证”(41106128)；辽宁省高等学校青年学者成长支持计划“盐度胁迫下刺参生理特性及分子调控机制研究”（LJQ2012064）；国家“863”计划项目“高值海珍品良种培育”(2012AA10A412)。

Establishment of Two-dimensional Gel Electrophoresis (2-DE) for Coelomic Fluid in Apostichopus japonicus

Received:2013-12-09 Revised:2014-03-13 Online:2014-05-15 Published:2014-05-15

摘要/Abstract

摘要： 为了探索并建立刺参的体腔液蛋白双向电泳体系，实验对刺参体腔液的蛋白质制备方法、上样量、IPG 胶条的pH选择及等电聚焦程序进行了优化，并利用银染法进行染色。结果表明：改进的TCA-丙酮沉淀法增加了提取的蛋白量和纯度；采用8.5 cm，pH 4~6.5的IPG胶条，45 μg蛋白上样量，等电聚焦先设250 v电压，7 mA电流，聚焦时间30 min后，再将电压升至1000 v，聚焦时间3 h，能有效提高双向电泳(2-DE)图谱中蛋白点的分离度和分辨率。本实验可用于筛选刺参差异表达蛋白以及后续的刺参蛋白质组学研究。

关键词: 百合属, 百合属, 简单重复间隔序列, 反应体系, 优化

Abstract: In order to use 2-DE analysis in the coelomic fluid proteins of Apostichopus japonicus. The protein extraction methods, sample volume, pH of IPG gel strips and isoelectric focusing programs were optimized to obtain best results. The results showed that the protein yield and purity were increased by improved TCA-acetone precipitation treatment. The resolution and reproducibility of 2-DE profiles were significantly improved by electing 8.5 cm ( pH 4-6.5) IPG gel strips, loading the sample 45 μg and seting 250 v, 7 mA isoelectric focusing for 30 min then 1000 v for 3 h. The result offered an important reference in screening differential expression protein and proteomics in Apostichopus japonicus.

梁学旺田燚湛垚垚常亚青. 刺参体腔液蛋白质双向电泳体系的建立及优化[J]. 中国农学通报, 2014, 30(14): 39-45.

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刺参体腔液蛋白质双向电泳体系的建立及优化

Establishment of Two-dimensional Gel Electrophoresis (2-DE) for Coelomic Fluid in Apostichopus japonicus

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