以花生品种花育20为材料,探讨不同的酶液浓度、酶解时间及渗透压对花生原生质体分离的影响。结果表明:原生质体分离的适宜酶液配比是2%纤维素酶(Cellulase Onozuka RS)、0.2%果胶酶(Pectolyase Y-23),甘露醇渗透压调节剂的浓度为0.7 mol/L,暗处理10 h,叶片原生质体产量为4.86×105/ml,存活率75.6%,愈伤组织原生质体产量为4.97×105/ml,存活率75.4%。将分离的原生质体培养在添加1mg/LNAA和4mg/LBAP的改良MS液体培养基中。培养约2~3d后,细胞开始分裂。然后部分细胞继续分裂,并形成细胞团。培养5~6周后,将培养物转移到添加2mg/L2,4-D和3mg/LBAP的MS液体培养基(pH 5.8)中进行培养。7~8周后,将形成的直径为1~2mm的小愈伤组织转移到添加1mg/LNAA和5mg/LBAP的MS固体培养基上培养,小愈伤组织迅速生长。转移3~4周后,愈伤组织长至7~9mm。