中国农学通报 ›› 2011, Vol. 27 ›› Issue (13): 126-129.
郑娜 祁建军 孙鹏 秦民坚 李先恩
摘要:
探讨一种有效提取滇重楼胚总RNA方法。以滇重楼的胚为实验材料,将常规的SDS提取植物总RNA的方法做了改进:在RNA提取缓冲液中加入SDS的步骤上进行了调整,结合异丙醇和醋酸钠室温沉淀能更有效的去除多糖;醋酸-醋酸钠的缓冲体系维持提取液较低pH值,有效抑制RNA酶活性;将SDS的浓度提高到5%并且结合酸酚/氯仿抽提去除蛋白质污染,首次建立了一种简单有效的从滇重楼胚中提取总RNA的方法。该方法所提RNA的A260/A230均大于2.0,A260/A280的值为1.8~2.0,电泳条带清晰,RNA完整性好。利用该方法提取的滇重楼幼胚总RNA具有很高的纯度和质量,可以满足后续LD-PCR及文库构建等分子生物学研究。