为了探究外源添加维生素B12(Vitamin B12, VB12)对Klebsiella pneumoniae HD79和K. pneumoniae HD79-T利用甘油还原途径生产3-羟基丙酸(3-hydroxypropionic acid, 3-HP)的影响以及摸索VB12对K. pneumoniae HD79和K. pneumoniae HD79-T的阈值上限,将不同浓度(0.01、0.02、0.03、0.04、0.05 g/L)的VB12添加到K. pneumoniae HD79及K. pneumoniae HD79-T的发酵培养基中,利用HPLC检测其底物消耗及产物产生情况、qRT-PCR检测还原途径相关基因的mRNA表达情况以及酶联免疫试剂盒检测代谢相关酶活性。结果表明,VB12对K. pneumoniae HD79和K. pneumoniae HD79-T的阈值为0.01 g/L和0.03 g/L。与未添加VB12相比,菌株K. pneumoniae HD79和K. pneumoniae HD79-T的3-HP产量分别提高了24.39%,8.86%;醛脱氢酶基因puuC表达量分别提高了2.49倍和1.68倍;ALDH、GDHt和PDOR的酶活力分别提高了50.24%、40.36%和18.29%,及30.49%、37.84%和13.56%。说明通过外源添加辅酶因子VB12对肺炎克雷伯氏菌高产3-HP是可行策略。