刺槐EST-SSR标记PCR反应体系的优化

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.2014-0325

中国农学通报 ›› 2014, Vol. 30 ›› Issue (22): 45-52.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.2014-0325

刺槐EST-SSR标记PCR反应体系的优化

赵克奇董黎孙宇涵孙文婷袁存权王玉玲荀守华张江涛李云

收稿日期:2014-02-14 修回日期:2014-03-08 出版日期:2014-08-05 发布日期:2014-08-05
基金资助:
国家自然科学基金项目“刺槐杂交结实率低的机理研究”(31170629)；林业公益性行业科研专项“刺槐属种质资源收集保存与创新利用研究”(201304116)；国家科技支撑项目“抗逆生态树种刺槐新品种选育技术研究”(2012BAD01B0601)。

The Optimization of EST-SSR PCR Reaction System for Robinia pseudoacacia L.

Received:2014-02-14 Revised:2014-03-08 Online:2014-08-05 Published:2014-08-05

摘要/Abstract

摘要： 为建立一套适用于刺槐EST-SSR标记的PCR反应体系，采用L₁₆(4⁵)正交试验设计结合单因素试验，对刺槐EST-SSR PCR反应体系中的5个主要因素：引物、DNA模板、dNTPs、Mg²⁺和Taq DNA聚合酶进行优化试验。结果表明：在20μL反应体系中，各反应因素的最佳水平为0.5μmol/L引物、30 ng模板DNA、0.15 mmol/L dNTP、0.5 mmol/L Mg²⁺、1.0 U Taq DNA聚合酶。利用随机挑选的3个刺槐优良无性系品种和7对EST-SSR引物对优化体系进行验证，结果均能获得稳定、清晰的条带，证明该体系稳定可靠。此优化体系的建立为刺槐EST-SSR标记的开发以及利用EST-SSR标记深入研究和利用中国刺槐种质资源奠定基础。

关键词: 有效元素变化, 有效元素变化

Abstract: In order to establish EST-SSR Polymerase Chain Reaction (PCR) system of Robinia pseudoacacia L., L₁₆(4⁵) orthogonal design and single factor experiment was used to optimize 5 main factors affecting SSRPCR system: primer, template DNA, dNTPs, Mg²⁺ and Taq DNA polymerase. The results showed that the optimal reaction system was 20μL total reaction system containing 0.5μmol/L each primer, 30 ng temple DNA, 0.15 mmol/L dNTPS, 0.5 mmol/L Mg²⁺, 1.0 U Taq DNA polymerase. The author randomly selected 3 varieties of black locust clones and 7 EST-SSR primers to test this optimized EST-SSR system, stable and clear polymorphic bands were acquired. the establish of this optimal reaction system laid the foundation for the development of EST-SSR markers and using EST-SSR markers in-depth study and made use of the locust tree germplasm resources in China.

赵克奇董黎孙宇涵孙文婷袁存权王玉玲荀守华张江涛李云. 刺槐EST-SSR标记PCR反应体系的优化[J]. 中国农学通报, 2014, 30(22): 45-52.

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刺槐EST-SSR标记PCR反应体系的优化

The Optimization of EST-SSR PCR Reaction System for Robinia pseudoacacia L.

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