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中国农学通报

中国农学通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (6): 136-141.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.2014-2391

• 生物技术科学 • 上一篇    下一篇

茭草ISSR-PCR体系的优化

仇玉萍,吕玉凤   

  1. (国家高原湿地研究中心/西南林业大学,昆明 650224）
  • 收稿日期:2014-09-02 修回日期:2015-02-07 接受日期:2014-10-14 出版日期:2015-03-20 发布日期:2015-03-20
  • 通讯作者: 仇玉萍
  • 基金资助:
    国家科技部“973”计划前期研究专项“筑坝扩容下滇西北典型湿地湖滨带植被演替机制”(2012CB426509)；西南林业大学科研启动基金项目“水稻WRKY45基因的功能研究”(111041)。

Optimization of ISSR-PCR System of Zizania latifolia

Qiu Yuping, Lv Yufeng   

  1. (National Plateau Wetland Research Center/Southwest Forestry University, Kunming 650224)
  • Received:2014-09-02 Revised:2015-02-07 Accepted:2014-10-14 Online:2015-03-20 Published:2015-03-20

摘要： 为了建立适用于茭草的ISSR-PCR反应体系，以湿地植物茭草基因组DNA为研究对象，筛选引物为UBC818，采用正交试验设计方法，建立了茭草ISSR-PCR反应体系和扩增程序。结果表明，在 25 μL反应体系中含有1×PCR缓冲液、250 μmol/L dNTP、2.0 mmol/L MgCl2、0.5 μmol/L引物、1.0 U Taq DNA聚合酶和100 ng模板DNA最适用于茭草ISSR-PCR扩增。适宜的扩增程序为94℃ 5 min；94℃ 1 min；56℃ 45 s；72℃ 90 s；35个循环；72℃ 10 min；4℃保存。

关键词: 食品供应链, 食品供应链, 社会责任风险, 传导机制

Abstract:
In order to establish a suitable ISSR-PCR reaction system for Zizania latifolia, the wetlands plant Zizania latifolia genomic DNA was optimized with choosing the primer UBC818. We used the orthogonal design to establish an ISSR-PCR reaction system and amplification program. The results indicated that 25 μL reaction system containing 1×PCR buffer, 250 μmol/L dNTP, 2.0 mmol/L MgCl2, 0.5 μmol/L primer, 1 U Taq DNA polymerase and 100 ng template DNA was suitable to ISSR-PCR amplifying. Amplification program as followed: pre-denaturation at 94℃ for 5 min, denaturrtion at 94℃ for 1 min, annealing at 56℃ for 45 s, extending at 72℃ for 90 s, after 35 cycles, then extending again at 72℃ for 10 min and keeping at 4℃.