超声波辅助农杆菌介导SeNHX1基因转化紫花苜蓿的研究

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.2013-2796

中国农学通报 ›› 2014, Vol. 30 ›› Issue (18): 264-270.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.2013-2796

所属专题：生物技术

超声波辅助农杆菌介导SeNHX1基因转化紫花苜蓿的研究

薛晓锋周岩陈亚东陶烨陈燕绘

收稿日期:2013-10-28 修回日期:2013-11-22 出版日期:2014-06-25 发布日期:2014-06-25
基金资助:
河南省基础与前沿技术研究计划项目 “苜蓿体细胞胚胎发生的遗传学机制研究” (112300410014)。

Transformation of SeNHX1 Gene in Alfalfa (Medicago. sativa) by Sonication Assisted Agrobacterium-mediated Gene Transfer

Received:2013-10-28 Revised:2013-11-22 Online:2014-06-25 Published:2014-06-25

摘要/Abstract

摘要： 为建立高效快速的紫花苜蓿遗传转化体系，以紫花苜蓿6个栽培品种为材料，采用超声波辅助农杆菌介导法，对影响紫花苜蓿遗传转化体系的若干因素进行了研究。结果显示，6个栽培品种对卡那霉素敏感性不同，维多利亚为40 mg/L，而其他5个品种为50 mg/L；通过梯度实验表明：根癌农杆菌侵染浓度OD600为0.4~0.5，侵染时间为10~15 min，超声波处理时间为10 min是实现紫花苜蓿子叶转化及抗性愈伤组织形成较为有利的组合。卡那霉素抗性愈伤组织DNA的PCR扩增显示，转化体和质粒DNA分别扩增出长度大约为546 bp的清晰条带，初步表明耐盐SeNHX1基因已整合至紫花苜蓿愈伤组织中。

关键词: 地统计学, 地统计学

Abstract: In order to establish a high frequency and rapid regeneration system for the genetic transformation of alfalfa. Six cultivars of alfalfa were applied to investigate some factors which affect alfalfa genetic transformation system, such as ultrasonication, the concentration and time of agrobacterium tumefaciens infection and so on, by sonication assisted agrobacterium-mediated. Experimental results showed that, the best combination for alfalfa cotyledon transformation and resistant callus information were as follows: the concentration of agrobacterium tumefaciens infection OD600 was 0.4-0.5, and the appropriate time of infection was 10-15 min, with 10 minutes’ of ultrasonication in the meantime. PCR amplification of the DNA of kanamycin resistance callus revealed that, transformant and plasmid DNA amplified about 546 bp distinct stripe with the length respectively, which means salt tolerance gene SeNHX1 have integrated into alfalfa callus.

薛晓锋周岩陈亚东陶烨陈燕绘. 超声波辅助农杆菌介导SeNHX1基因转化紫花苜蓿的研究[J]. 中国农学通报, 2014, 30(18): 264-270.

参考文献

[1] 王强龙,王锁民,张金林,等.紫花苜蓿体细胞胚高频再生体系的建立[J].草业科学,2006,23(11):21-27.
[2] Webb K J. Transorformation of forage legumes using Agrobacterium tmueafciens[J]. Theor Appl Genet,1986(72):53-58.
[3] Winicov I, Bastola D R. Transgenic overexpression of the transcription factor Alfin1 enhances expression of the endogenous MsPRP2 gene in alfalfa and improves salinity tolerance of the plants [J]. Plant Physiology,1999,120(2):473-480.
[4] Qiao W H, Zhao X Y, Li W, et al. Overexpression of AeNHX1, a root-specific vacuolar Na+/H+ antiporter from Agropyron elongatum, confers salt tolerance to Arabidopsis and Festuca plants[J]. Plant Cell Report,2007,26(9):1663-1672.
[5] 赵红娟,张博,李培英,等.农杆菌介导犁苞滨藜NHX基因转化苜蓿的影响因素[J].草地学报,2007,15(5):418-422.
[6] 王强龙,王锁民,张金林,等.根癌农杆菌介导 AtNHX1 基因转化紫花苜蓿的研究[J].草业科学,2006,23(12):55-59.
[7] Zhou S F,Chen X Y, Zhang X G, et al. Improved salt tolerance in tobacco plantsby co- transformation of a betaine synthesis gene BADH and a vacuolar Na +/H + antiporter gene SeNHX1[J]. Biotechnol Lett,2008(30):369-376.
[8] 周岩,薛晓锋,魏琦超,等.口蹄疫抗原决定簇融合基因转化拟南芥初步研究[J].广东农业科学,2011(17):104-105,108.
[9] 王紫萱,易自力.卡那霉素在植物转基因中的应用及其抗性基因的生物安全性评价[J].中国生物工程杂志,2003,23(6):9-13.
[10] 马伶俐.紫花苜蓿再生体系的建立及农杆菌介导的BAHD基因转化研究[D].兰州:甘肃农业大学,2008.
[11] 张芳,王舟,宗俊勤,等.农杆菌介导的假俭草遗传转化体系的建立[J].草业学报,2011,20(2):184-192.
[12] 徐春波,王勇,赵海霞,等.农杆菌介导的紫花苜蓿高效遗传转化体系的研究[J].生物技术通报,2011(4):93-97.
[13] 刘小琳,王继峰,胡晓艳,等.根癌农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化体系的建立与优化[J].中国草地学报,2007,29(2):102-106.
[14] 马晖玲,卢欣石,曹致中,等.紫花苜蓿基因转化的影响因素分析[J].草业学报,2006,15(5):94-102.
[15] 潘竟丽,张富春.农杆菌介导灰绿藜NHX1基因转化新疆大叶苜蓿的研究[J].新疆农业科学.2007,44(4):418-422.
[16] Nicoletta Ferradini,Alessandro Nicolia,Stefano Capomaccio,et al. Assessment of simple marker- free genetic transformation techniques in alfalfa[J]. Plant Cell Reprots,2011(30):1991-2000.
[17] Weeks J T, Ye J S, Rommens C M. Development of an in planta method for transformation of alfalfa (Medicago sativa) [J].Springer Transgenic Res,2008(17):587-597.
[18] 申玉华,李望丰,金太成,等.根癌农杆菌介导的苜蓿悬浮胚性愈伤遗传转化体系的建立与优化[J].植物研究,2009,29(6):721-727.
[19] 张莹,董燕,易良杰,等.超声波辅助农杆菌介导法转化鱼腥草的初步研究[J].江西农业学报,2010,22(4):9-11.

超声波辅助农杆菌介导SeNHX1基因转化紫花苜蓿的研究

Transformation of SeNHX1 Gene in Alfalfa (Medicago. sativa) by Sonication Assisted Agrobacterium-mediated Gene Transfer

PDF (PC)

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

关于本刊

作者中心

审者中心

在线期刊

联系我们

[1]	孙喜军, 邓睿, 吕爽, 高莹, 蔡苗, 缑巧红, 赵娟. 西安市农用地土壤有机质空间变异特征[J]. 中国农学通报, 2022, 38(35): 43-53.
[2]	郭佳, 靳少非, 王库. 城市快速扩张背景下城乡交错区土壤重金属的空间分布特征及影响因素分析[J]. 中国农学通报, 2022, 38(17): 103-109.
[3]	罗丹, 毛忠安, 张庭瑜, 常庆瑞. 延河流域耕层土壤养分空间变异及与地形因子的相关性研究[J]. 中国农学通报, 2022, 38(12): 79-87.
[4]	任煜堃. 山西省森林土壤因子空间变异特征[J]. 中国农学通报, 2021, 37(32): 42-50.
[5]	乔磊, 黄明镜, 张吴平, 王国芳, 任健. 晋中盆地典型耕地厚度、土壤养分空间变异[J]. 中国农学通报, 2020, 36(1): 89-97.
[6]	孟菁,孙喜军,吕爽,王安,王小荣,王虎,蔡苗. 西安市耕地土壤有效态微量元素的空间变异特征[J]. 中国农学通报, 2019, 35(23): 58-65.
[7]	吴美玲,田晋文. 基于GIS和地统计学的黔西北农业园区土壤养分空间变异特征研究[J]. 中国农学通报, 2019, 35(17): 48-53.
[8]	郭安廷,崔锦霞,许鑫,马新明. 基于GIS与地统计的土壤养分空间变异研究[J]. 中国农学通报, 2018, 34(23): 72-79.
[9]	吴倩鑫,杨联安. 蔬菜地土壤重金属含量空间插值精度分析[J]. 中国农学通报, 2016, 32(23): 81-86.
[10]	段晓艳,胡业翠. 基于景观类型的北京市生态风险时空特征分析[J]. 中国农学通报, 2015, 31(29): 82-89.
[11]	罗志明,尹炯,黄应昆,李文凤,王晓燕,张荣跃,单红丽. 甘蔗苗期大螟幼虫空间格局的地统计学分析[J]. 中国农学通报, 2015, 31(20): 86-90.
[12]	孙鹏举,骆有庆,姚东华,刘春亮,宗世祥. 沙柳木蠹蛾幼虫危害特性及空间格局研究[J]. 中国农学通报, 2015, 31(10): 182-186.
[13]	乔璐谭少清刘玉洪刘长铭. 哀牢山亚热带常绿阔叶林表层矿质土壤的空间异质性格局[J]. 中国农学通报, 2013, 29(22): 67-72.
[14]	王库. 回归克里格在土壤全氮空间预测上的应用[J]. 中国农学通报, 2013, 29(20): 142-147.
[15]	焦晓光陈渊张兴义张少良隋跃宇. 黑龙江典型县域农田黑土全量养分性状分析[J]. 中国农学通报, 2011, 27(15): 132-136.