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中国农学通报 ›› 2017, Vol. 33 ›› Issue (5): 17-23.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb16080046

所属专题： 生物技术

• 生物技术科学 • 上一篇    下一篇

香蕉MaSIP2-2基因的克隆、序列分析及表达载体构建

许奕,金志强,徐碧玉,胡伟,黄东梅,宋顺   

  1. 中国热带农业科学院海口实验站 海南省香蕉遗传改良重点实验室,中国热带农业科学院海口实验站 海南省香蕉遗传改良重点实验室,中国热带农业科学院热带生物技术研究所 农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室,中国热带农业科学院热带生物技术研究所 农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室,中国热带农业科学院海口实验站 海南省香蕉遗传改良重点实验室,中国热带农业科学院海口实验站 海南省香蕉遗传改良重点实验室
  • 收稿日期:2016-08-10 修回日期:2017-01-05 接受日期:2016-10-25 出版日期:2017-03-01 发布日期:2017-03-01
  • 通讯作者: 许奕
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目“MaPIP1;1 介导香蕉响应干旱胁迫的分子调控机制解析”(31501371)

Cloning, Sequence Analysis and Expression Vector Construction of MaSIP2-2 from Banana

  • Received:2016-08-10 Revised:2017-01-05 Accepted:2016-10-25 Online:2017-03-01 Published:2017-03-01

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摘要： 为进一步研究植物中水通道蛋白的表达调控以及作用机制，从香蕉中克隆了一个水通道蛋白(AQP)基因MaSIP2-2，同时运用生物学软件对该基因进行序列分析，并且构建了MaSIP2-2 的植物表达载体。序列分析表明，该基因存在一个完整的开放阅读框(ORF)780 bp，编码260 个氨基酸。多序列比对和进化树分析表明，MaSIP2-2 所编码的蛋白与其他植物中SIP 编码的蛋白具有较高的一致性。与马来西亚野生香蕉、油棕、甜橙、海枣、梅、可可、菠萝的AQP 编码的氨基酸序列的同源性分别为98%、62%、53%、52%、57%、55%、59%。MaSIP2-2 编码的蛋白质分子量为28800.62 Da，理论等电点pI 为9.13，其亲水性氨基酸均匀分布在整个肽链中，多于疏水性氨基酸。通过PCR和酶切反应鉴定，成功构建该基因的表达载体。研究结果表明MaSIP2-2 是水通道蛋白中小的内在蛋白的一个成员，为后续对其进行功能验证奠定基础。

关键词: 叶绿素仪, 叶绿素仪, 棉花氮营养状况, 氮肥推荐

Abstract: To further study the regulation of aquaporin expression and the mechanism in plants, we cloned an aquaporin gene MaSIP2- 2 from banana, meanwhile analyzed the gene sequence by the biology software and constructed the plant expression vector. Sequence analysis indicated that MaSIP2-2 had complete ORF, 780 bp, and it encoded 260 amino acids. Multiple sequence alignment and the phylogenetic tree analysis indicated that the protein encoded by MaSIP2- 2 was in high similarity with SIP-encoding protein in the other plants. The homology with amino acid sequences in Musa acuminate, Elaeis guineensis, Citrus sinensis, Phoenix dactylifera, Prunus mume, Theobroma cacao and Ananas comosus was 98%, 62%, 53%, 52%, 57%, 55%, 59%, respectively. The protein molecular weight of MaSIP2-2 was 28800.62 Da, and the theoretical isoelectric point (pI) was 9.13. The hydrophilic amino acids uniformly distributed throughout the peptide, and more than the hydrophobic amino acids. The expression vector of the gene was successfully constructed by PCR and identified by restriction enzyme digestion reactions. The research results showed that MaSIP2-2 was a member of the aquaporin small and basic intrinsic proteins, and provided base for functional verification in the future.