药用植物白及组培苗瓶内复壮研究

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb20190800510

中国农学通报 ›› 2020, Vol. 36 ›› Issue (22): 61-68.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb20190800510

所属专题：园艺

药用植物白及组培苗瓶内复壮研究

席银凯¹^,²(), 黄衡宇¹^,³(), 曾彪⁴()

¹云南中医药大学/云南省道地濒危中药材繁育与栽培工程技术研究中心,昆明 650500
²贵州中医药大学,贵阳 550000
³丽江市古城区秋成种养殖有限公司,云南丽江 674100
⁴云南省农业科学院,昆明 650200

收稿日期:2019-08-09 修回日期:2019-11-19 出版日期:2020-08-05 发布日期:2020-07-22
通讯作者: 黄衡宇,曾彪
作者简介:席银凯,女,1993年出生,云南人,硕士研究生,研究方向主要为药用植物学与化学成分研究。通信地址：550025 贵州省贵阳市花溪区党武乡栋青路贵州中医药大学,E-mail: xyk_xyt@163.com。
基金资助:
国家自然科学基金“活性氧物质(ROS)调控滇重楼种子萌发成苗的分子机制研究”(81860674);云南省科技厅重点工程技术研究中心项目“云南省道地濒危中药材繁育与栽培工程技术研究中心”(2016DH011)

The Rejuvenation of Medicinal Plant Bletilla striata in Vitro

Xi Yinkai¹^,²(), Huang Hengyu¹^,³(), Zeng Biao⁴()

¹Yunnan University of Chinese Medicine/Yunnan Breeding and Cultivation Research and Development Center of Endangered and Daodi Traditional Chinese Medicinal Materials, Kunming 650500
²Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550000
³Qiucheng Breeding Company Limited, Lijiang Yunnan 674100
⁴Yunnan Academy of Agricultural Sciences, Kunming 650200

Received:2019-08-09 Revised:2019-11-19 Online:2020-08-05 Published:2020-07-22
Contact: Huang Hengyu,Zeng Biao

摘要/Abstract

摘要：

对白及(Bletilla striata)试管苗进行复壮研究,以期解决其羸弱纤细、不利于生根培养及生根后成活率低等问题,同时优化复壮培养条件。在课题组已有的白及增殖及生根培养基配方中,分别添加不同质量浓度植物生长延缓剂多效唑(PP₃₃₃)和矮壮素(CCC)并改变培养基碳源浓度,以不同继代试管苗为材料,通过单因素和L₉(3⁴)正交实验研究不同材料和不同植物生长延缓剂种类及其质量浓度对试管苗复壮、繁殖生长、生根培养及驯化移栽的影响。实验表明,4代苗在MS+活性炭1.0 g/L+香蕉泥50 g/L+ 6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.01 mg/L+ PP₃₃₃0.5 mg/L+CCC 0.1 mg/L+蔗糖40 g/L中获得最佳的复壮效果,培养70天后,试管苗基茎直径平均达(0.26±0.06) cm,繁殖系数2.13,假鳞茎发生率100%;复壮后的试管苗在1/2MS+活性炭1.0 g/L+香蕉泥80 g/L+ 6-BA 0.1 mg/L+ NAA 1.0 mg/L+蔗糖15 g/L中培养60天后,可获得具假鳞茎、根粗苗壮的再生植株,生根率100%;再生苗移栽成活率亦达100%。本研究完善了白及体外快繁及复壮条件,建立了高效的植株再生体系。

关键词: 白及, 复壮培养, 植物生长延缓剂, 假鳞茎, 驯化移栽

Abstract:

Since the transplanting seedlings are difficult to adapt to rooting culture and domestication due to the tenuous stems in medium, the rejuvenation research was conducted using test-tube plantlets of Bletilla striata by optimizing the conditions of the medium. Based on the proliferative and rhizogenic formulas established in our previous study, the single factor and L₉(3⁴) orthogonal experiment were carried out using different subculture plantlets, different concentrations of plant growth retardant (PP₃₃₃ and CCC) and carbon source, aiming to investigate the impact of different types and concentrations of plant growth retardant and explants on rejuvenation, multiplication, rooting culture and transplanting. L₉(3⁴) orthogonal test exhibited that the optimal rejuvenation medium was MS+ 1.0 g/L AC+ 50 g/L banana puree+ 0.5 mg/L 6-BA+ 0.01 mg/L NAA+ 0.5 mg/L PP₃₃₃+ 0.1 mg/L CCC+ 40 g/L sucrose for the fourth generation. After 70 d, the diameter of the plantlets’ basal part of stem, the growth coefficient and the occurrence rate was (0.26±0.06) cm, 2.13 and 100%, respectively. The pseudobulbs and roots were sent forth from rejuvenation plantlets after 60 d on the 1/2MS medium containing 1.0 g/L AC, 80 g/L banana puree, 0.1 mg/L 6-BA, 1.0 mg/L NAA and 15 g/L sucrose. The survival rate of transplant seedlings was 100%. High-efficiency regeneration system of B. striata with optimal rejuvenation condition was established.

Key words: Bletilla striata, rejuvenation cultivation, plant growth retardant, pseudobulb, acclimatization transplant

中图分类号:

R282.21

席银凯, 黄衡宇, 曾彪. 药用植物白及组培苗瓶内复壮研究[J]. 中国农学通报, 2020, 36(22): 61-68.

Xi Yinkai, Huang Hengyu, Zeng Biao. The Rejuvenation of Medicinal Plant Bletilla striata in Vitro[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2020, 36(22): 61-68.

图/表 10

水平	因素
水平	A.PP₃₃₃/(mg/L)	B.CCC/(mg/L)	C.蔗糖/(g/L)
1	0.1	0.1	35
2	0.5	0.5	40
3	1.0	1.0	50

表1. 复壮培养L9 (34) 正交设计

图1. 种子萌发、继代增殖和生根培养 A为种子萌发,大量原球茎出现;B为35天后幼苗生长迅速;C为70天后待转接的播种瓶苗;D为1代繁殖瓶苗;E为刚转接的2代繁殖瓶苗;F为3代繁殖瓶苗;G为4代繁殖瓶苗;H为生根试管苗

图2. 分别添加CCC与PP333对不同增殖代数试管苗的培养效果 A为CCC组中的1代增殖苗;B为PP333组中的1代增殖苗;C为CCC组中的2代增殖苗;D为PP333组中的2代增殖苗;E为CCC组中的3代增殖苗;F为PP333组中的3代增殖苗;G为CCC组中的4代增殖苗;H为PP333组中的4代增殖苗

编号		因素				基茎大小/cm	假鳞茎发生率/%
编号		A.PP₃₃₃/(mg/L)	B.CCC/(mg/L)	C.蔗糖/(g/L)	D.误差	基茎大小/cm	假鳞茎发生率/%
A1		0.1	0.1	35	(1)	0.19	87.86
A2		0.1	0.5	40	(2)	0.14	92.33
A3		0.1	1.0	50	(3)	0.12	81.54
A4		0.5	0.1	40	(3)	0.26	100.00
A5		0.5	0.5	50	(1)	0.21	82.46
A6		0.5	1.0	35	(2)	0.22	96.92
A7		1.0	0.1	50	(2)	0.18	60.73
A8		1.0	0.5	35	(3)	0.15	68.18
A9		1.0	1.0	40	(1)	0.12	72.56
基茎大小	K₁	0.15	0.210	0.187	0.173
	K₂	0.23	0.167	0.173	0.180
	K₃	0.15	0.153	0.170	0.177
	R₁	0.08	0.057	0.017	0.007
假鳞茎发生率	K₁	87.243	82.863	84.320	80.960
	K₂	93.127	90.990	88.297	83.327
	K₃	67.157	83.673	74.910	83.240
	R₂	25.97	8.127	13.387	2.367

表2. 复壮培养L9(34)正交实验结果

源	III型平方和	自由度	均方	F	Sig.
A(PP₃₃₃)	0.013	2	0.006	6.621	P<0.05
B(CCC)	0.005	2	0.003	1.185	P>0.05
C（蔗糖）	0.000	2	0.000	0.077	P>0.05
误差	0.000	2	0.000

表3. 基茎大小方差分析结果

水平	均值	0.05水平
2	0.23	a
3	0.15	b
1	0.15	b

表4. PP333水平Duncan检验

源	III型平方和	自由度	均方	F	Sig.
A(PP₃₃₃)	1112.529	2	556.264	10.917	P<0.05
B(CCC)	11.366	2	5.683	0.024	P>0.05
C(蔗糖)	283.565	2	141.782	0.750	P>0.05
D(误差)	10.807	2	5.404

表5. 假鳞茎发生方差分析结果

水平	均值	0.05水平
2	93.127	a
1	87.243	a
3	67.157	b

表6. PP333水平Duncan检验

图3. 复壮培养 A为刚转入复壮培养基中的材料;B为培养10天后的复壮苗;C为培养30天后的复壮苗;D为培养60天后的复壮苗;E、F为培养75天、待转接生根的复壮苗

图4. 复壮苗生根培养和炼苗驯化 A为复壮苗生根培养75天;B为未复壮生根苗（上）与复壮生根苗（下）;C为驯化30天后的复壮苗;D为驯化60天后的复壮苗

参考文献 32

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