合作猪HMOX1基因过表达载体构建及组织表达分析

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb2021-0808

中国农学通报 ›› 2022, Vol. 38 ›› Issue (29): 140-145.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb2021-0808

所属专题：生物技术；水产渔业

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合作猪HMOX1基因过表达载体构建及组织表达分析

李建荣¹(), 王伟¹, 罗定国¹, 马晓霞¹, 徐美玲¹, 滚双宝¹^,²(), 杨巧丽¹()

¹甘肃农业大学动物科学技术学院,甘肃兰州730070
²甘肃省现代养猪技术工程研究中心,甘肃兰州730070

收稿日期:2021-08-25 修回日期:2022-01-06 出版日期:2022-10-15 发布日期:2022-10-14
通讯作者: 滚双宝,杨巧丽
作者简介:李建荣,男,1997年出生,甘肃渭源人,硕士研究生,研究方向：畜牧学。通信地址：730070 甘肃省兰州市安宁区营门村一号甘肃农业大学动物科学技术学院,E-mail： 2531743927@qq.com。
基金资助:
甘肃省大学生创新创业训练计划项目“不同发育时期合作猪血清激素水平变化研究”(S202010733029)

Overexpression Vector Construction and Tissue Expression Analysis of HMOX1 Gene in Hezuo Pigs

LI Jianrong¹(), WANG Wei¹, LUO Dingguo¹, MA Xiaoxia¹, XU Meiling¹, GUN Shuangbao¹^,²(), YANG Qiaoli¹()

¹College of Animal Science and Technology, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070
²Gansu Research Center for Swine Production Engineering and Technology, Lanzhou 730070

Received:2021-08-25 Revised:2022-01-06 Online:2022-10-15 Published:2022-10-14
Contact: GUN Shuangbao,YANG Qiaoli

摘要/Abstract

摘要：

为了构建合作猪HMOX1基因过表达载体,并分析其组织表达特征,本研究通过PCR扩增获取合作猪HMOX1基因完整CDS区序列,将其插入到pcDNA3.1(+)过表达载体中,构建pcDNA3.1-HMOX1过表达载体;并通过实时荧光定量PCR检测HMOX1基因在合作猪心、肝、脾、肺、肾、胃、十二指肠和背最长肌中的表达情况。结果显示,成功扩增出合作猪HMOX1基因924 bp的完整CDS区,通过双酶切和测序鉴定,HMOX1基因成功连接到pcDNA3.1(+)过表达载体中。组织表达结果显示,HMOX1基因在合作猪组织中表达量最高是脾脏,显著高于其它组织(P<0.05),其次是肝脏、肺脏、肾脏和心脏,在十二指肠中的表达量最低。研究结果为进一步研究HMOX1基因在合作猪高海拔低氧适应过程中的功能提供了重要参考。

关键词: 合作猪, HMOX1基因, 载体构建, 组织表达

Abstract:

In order to construct an overexpression vector of HMOX1 gene in Hezuo pigs and analyze its tissue expression characteristics, the complete CDS region sequences of HMOX1 gene were obtained by PCR amplification, and then were inserted into pcDNA3.1 (+) blank vector to construct pcDNA3.1-HMOX1 overexpression vector. At the same time, the expression of HMOX1 gene in the heart, liver, spleen, lung, kidney, stomach, duodenum and longissimus dorsi muscle of Hezuo pigs were detected by real-time quantitative PCR. The results showed that the completed CDS region of 924 bp of HMOX1 gene was successfully amplified and identified by double enzyme digestion and sequencing, which was successfully linked to the pcDNA3.1(+) overexpression vector. Results of tissue expression analysis showed that HMOX1 gene expression was the highest in Hezuo pig spleen tissue, followed by liver, lung, kidney and heart, and the lowest was in duodenum. These results can provide reference for further research on the function of HMOX1 gene in the process of adaptation of Hezuo pigs to high altitude and hypoxia.

Key words: Hezuo pigs, HMOX1 gene, vector construction, tissue expression

中图分类号:

S828.8+9

李建荣, 王伟, 罗定国, 马晓霞, 徐美玲, 滚双宝, 杨巧丽. 合作猪HMOX1基因过表达载体构建及组织表达分析[J]. 中国农学通报, 2022, 38(29): 140-145.

LI Jianrong, WANG Wei, LUO Dingguo, MA Xiaoxia, XU Meiling, GUN Shuangbao, YANG Qiaoli. Overexpression Vector Construction and Tissue Expression Analysis of HMOX1 Gene in Hezuo Pigs[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2022, 38(29): 140-145.

图/表 5

基因名	序列(5’-3’)	大小/bp
HMOX1-CDS	F：CTAGCTAGCGAGCACTCACAGCCCAACAG	924
HMOX1-CDS	R：CCGCTCGAGCTCTCCAGGCAGAGTTCACG	924

表1. HMOX1基因CDS区扩增引物

引物名称	引物序列(5’-3’)	退火温度	长度	区域
HMOX1	F:GACATGGCCTTCTGGTATGGG	60	141 bp	348~368
HMOX1	R: CATGTAGCGGGTGTAGGCGT	60	141 bp	488~469
β-actin	F: ATATTGCTGCGCTCGTGGT	60	148 bp	142~160
β-actin	R: TAGGAGTCCTTCTGGCCCAT	60	148 bp	289~270

表2. 荧光定量PCR引物信息

图1. 合作猪HMOX1基因克隆

图2. 合作猪HMOX1基因真核表达载体构建注：A：菌液PCR检测结果;B：T载体质粒双酶切鉴定结果;C：过表达重组质粒双酶切鉴定结果

图3. 合作猪HMOX1基因组织表达分析注：相同大写字母表示差异不显著(P>0.05),不同大写字母表示差异显著(P<0.05)。

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Overexpression Vector Construction and Tissue Expression Analysis of HMOX1 Gene in Hezuo Pigs

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