改良CTAB法提取不同作物总RNA技术研究

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb2023-0668

中国农学通报 ›› 2024, Vol. 40 ›› Issue (11): 28-35.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb2023-0668

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改良CTAB法提取不同作物总RNA技术研究

刘国梅¹(), 郭淑慧², 孙璇², 姚琳², 张高扬², 杜春芳¹^,²()

¹ 山西农业大学农学院，山西晋中 030801
² 山西农业大学棉花研究所，山西运城 044000

收稿日期:2023-09-04 修回日期:2023-12-15 出版日期:2024-04-15 发布日期:2024-04-11
通讯作者:
杜春芳，女，1974年出生，研究员，博士，主要从事油菜遗传育种研究。通信地址：044000 山西省运城市盐湖区北城街道黄河大道118号山西农业大学棉花研究所，E-mail：chunfangdu@163.com。
作者简介:
刘国梅，女，1997年出生，在读硕士，研究方向：油菜遗传育种。通信地址：044000 山西省运城市盐湖区北城街道黄河大道118号山西农业大学棉花研究所，E-mail：1255977418@qq.com。
基金资助:
山西农业大学生物育种工程项目“油菜优异种质创新及广适多样性品种选育”(YZGC010); 运城市农业科技公关项目“油料作物（大豆、油菜、向日葵等）新品种选育及栽培技术集成”(2021YNZD01)

Technology of Improved CTAB Method for Extracting Total RNA from Different Crops

LIU Guomei¹(), GUO Shuhui², SUN Xuan², YAO Lin², ZHANG Gaoyang², DU Chunfang¹^,²()

¹ Agricultural College, Shanxi Agricultural University, Jinzhong, Shanxi 030801
² Cotton Research Institute, Shanxi Agricultural University, Yuncheng, Shanxi 044000

Received:2023-09-04 Revised:2023-12-15 Published:2024-04-15 Online:2024-04-11

摘要/Abstract

摘要：

为提高操作效率，本研究开发出一种简洁有效的作物总RNA提取方法。研究以油菜、棉花、花生、小麦、马铃薯、玉米、大豆、西葫芦等作物的不同组织为试材，通过CTAB法、改良CTAB法及TanSzol Reagent试剂盒法提取总RNA，检测结果发现，经过改良后的CTAB法提取的总RNA质量较高。在油菜花瓣、小麦、花生、西葫芦叶片中，该方法获得了较高的总RNA得率，分别为24.5、23.7、26.4、17.35 μg/mL；OD₂₆₀/₂₈₀和OD₂₆₀/₂₃₀值分别为1.90、1.73、1.72、1.80和2.10、1.50、2.01、1.70。综合比较以上3种方法，改良后的CTAB法适用于油菜、小麦、花生、西葫芦等作物的总RNA提取，为后续分子生物学检测奠定了基础。

关键词: 改良CTAB法, 总RNA, RNA提取

Abstract:

In order to improve the operation efficiency, a simple and effective method for crop total RNA extraction was developed. Total RNA was extracted from different tissues of rape, cotton, peanut, wheat, potato, corn, soybean, zucchini and other crops by CTAB method, improved CTAB method and TanSzol Reagent kit method. The detection results showed that the quality of total RNA extracted by improved CTAB method was higher. High total RNA yields were obtained in rape petals, wheat, peanut and zucchini leaves, which were 24.5, 23.7, 26.4 and 17.35 μg/mL, respectively; and the OD_260/280 and OD_260/230 values were 1.90, 1.73, 1.72, 1.80 and 2.10, 1.50, 2.01, 1.70, respectively. By comprehensive comparison of the above three methods, the improved CTAB method is suitable for total RNA extraction of rape, wheat, peanut, zucchini and other crops, which lays a foundation for subsequent molecular biological detection.

Key words: improved CTAB method, total RNA, RNA extraction

刘国梅, 郭淑慧, 孙璇, 姚琳, 张高扬, 杜春芳. 改良CTAB法提取不同作物总RNA技术研究[J]. 中国农学通报, 2024, 40(11): 28-35.

LIU Guomei, GUO Shuhui, SUN Xuan, YAO Lin, ZHANG Gaoyang, DU Chunfang. Technology of Improved CTAB Method for Extracting Total RNA from Different Crops[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2024, 40(11): 28-35.

图/表 9

参考文献 22

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作物	组织/器官	OD₂₆₀/₂₈₀	OD₂₆₀/₂₃₀	得率/(μg/mL)
油菜	花瓣	1.90±0.05	2.10±0.51 ^**	24.50±16.48 ^**
	根茎	1.87±0.05	1.68±0.54	25.60±18.31 ^**
	籽粒	1.65±0.21	1.44±0.56	21.51±20.40 ^**
小麦	叶片	1.73±0.10	1.50±0.22	23.65±21.83 ^**
花生	叶片	1.72±0.16	2.01±0.52 ^**	26.40±22.77 ^**
桑葚	叶片	1.48±0.16	1.24±0.61	1.63±24.50
西葫芦	叶片	1.80±0.20	1.70±0.42 ^*	17.35±12.80 ^**
棉花	叶片	1.45±0.87	1.21±0.02	8.50±7.40
大豆	叶片	1.57±0.17	1.38±0.42	5.75±5.93
马铃薯	叶片	1.75±0.23	1.54±0.31	5.40±4.10
玉米	叶片	1.44±0.07	1.19±0.02	3.35±1.73

作物	组织/器官	OD₂₆₀/₂₈₀	OD₂₆₀/₂₃₀	得率/(μg/mL)
油菜	花瓣	1.90±0.05	2.10±0.51 ^**	24.50±16.48 ^**
	根茎	1.87±0.05	1.68±0.54	25.60±18.31 ^**
	籽粒	1.65±0.21	1.44±0.56	21.51±20.40 ^**
小麦	叶片	1.73±0.10	1.50±0.22	23.65±21.83 ^**
花生	叶片	1.72±0.16	2.01±0.52 ^**	26.40±22.77 ^**
桑葚	叶片	1.48±0.16	1.24±0.61	1.63±24.50
西葫芦	叶片	1.80±0.20	1.70±0.42 ^*	17.35±12.80 ^**
棉花	叶片	1.45±0.87	1.21±0.02	8.50±7.40
大豆	叶片	1.57±0.17	1.38±0.42	5.75±5.93
马铃薯	叶片	1.75±0.23	1.54±0.31	5.40±4.10
玉米	叶片	1.44±0.07	1.19±0.02	3.35±1.73

作物	组织/器官	OD₂₆₀/₂₈₀	OD₂₆₀/₂₃₀	得率/(μg/mL)
油菜	花瓣	0.00±0.82	0.00±0.55	0.00±6.05
	根茎	0.91±0.09	0.55±0.00	2.47±3.58
	籽粒	1.22±0.40^*	0.72±0.18	4.23±1.82
小麦	叶片	1.35±0.53^*	1.04±0.64^*	11.7±5.65^*
花生	叶片	1.07±0.25	0.82±0.28^*	10.63±4.58^*
桑葚	叶片	1.13±0.31	0.55±0.00	6.17±0.12
西葫芦	叶片	0.66±0.16	0.56±0.02	4.90±1.15
棉花	叶片	1.21±0.39^*	0.57±0.02	12.77±6.7^*
大豆	叶片	0.00±0.82	0.00±0.55	0.00±6.05
马铃薯	叶片	1.44±0.63^*	1.19±0.49^*	14.43±7.38^*
玉米	叶片	0.00±0.82	0.00±0.55	0.27±5.78

作物	组织/器官	OD₂₆₀/₂₈₀	OD₂₆₀/₂₃₀	得率/(μg/mL)
油菜	花瓣	0.00±0.82	0.00±0.55	0.00±6.05
	根茎	0.91±0.09	0.55±0.00	2.47±3.58
	籽粒	1.22±0.40^*	0.72±0.18	4.23±1.82
小麦	叶片	1.35±0.53^*	1.04±0.64^*	11.7±5.65^*
花生	叶片	1.07±0.25	0.82±0.28^*	10.63±4.58^*
桑葚	叶片	1.13±0.31	0.55±0.00	6.17±0.12
西葫芦	叶片	0.66±0.16	0.56±0.02	4.90±1.15
棉花	叶片	1.21±0.39^*	0.57±0.02	12.77±6.7^*
大豆	叶片	0.00±0.82	0.00±0.55	0.00±6.05
马铃薯	叶片	1.44±0.63^*	1.19±0.49^*	14.43±7.38^*
玉米	叶片	0.00±0.82	0.00±0.55	0.27±5.78

改良CTAB法提取不同作物总RNA技术研究

Technology of Improved CTAB Method for Extracting Total RNA from Different Crops

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作物	组织/器官	时期
油菜	花瓣	盛花期
	根茎	角果期
	籽粒	成熟期
小麦	叶片	灌浆期
花生	叶片	苗期
桑葚	叶片	成熟期
西葫芦	叶片	结瓜期
棉花	叶片	苗期
大豆	叶片	幼苗期
马铃薯	叶片	结薯期
玉米	叶片	拔节期

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提取方法	时间	成本	效果	总和
传统CTAB	2	3	1	6
改良CTAB	3	2	3	8
TanSzol Reagent试剂盒	3	1	2	6

提取方法	时间	成本	效果	总和
传统CTAB	2	3	1	6
改良CTAB	3	2	3	8
TanSzol Reagent试剂盒	3	1	2	6