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中国农学通报 ›› 2010, Vol. 26 ›› Issue (1): 67-73.

所属专题: 生物技术

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抗体夹心BGT-ELISA方法的建立及在转基因白桦中的应用

曾凡锁 骆薇 赵宏翠 詹亚光 孙 东   

  • 收稿日期:2009-07-22 修回日期:2009-09-11 出版日期:2010-01-05 发布日期:2010-01-05

  • Received:2009-07-22 Revised:2009-09-11 Online:2010-01-05 Published:2010-01-05

摘要:

本文以转基因白桦(Betula platyphylla Suk.)中蜘蛛杀虫肽与Bt-toxin C肽融合蛋白(BGT)基因的表达产物为研究目标,采用原核表达及纯化出融合蛋白His-BGT作为抗原进行兔免疫,得到相应的抗血清,采用ELISA法检测效价在1:10 000以上,并对抗血清进行了免疫亲和层析,获得了高纯度的IgG,Western blot检测具有较好的特异性。采用过碘酸钠法将抗体标记辣根过氧化物酶(HRP),得到第二抗体即酶标抗体,标记率在85%以上。建立起检测BGT杀虫蛋白的快速、灵敏的方法。应用该检测方法,分析了5月份不同转基因白桦中BGT蛋白含量占叶片可溶性总蛋白含量的0.05~0.3%,并利用Western blot验证了此方法是可靠的。

关键词: 地理信息系统, 地理信息系统, 孟达自然保护区, 森林资源, 管理