芥蓝RAPD反应体系的建立

中国农学通报 ›› 2010, Vol. 26 ›› Issue (6): 22-25.

芥蓝RAPD反应体系的建立

陈文文,刘厚诚,陈日远,宋世威,孙光闻

收稿日期:2009-10-27 修回日期:2009-11-19 出版日期:2010-03-20 发布日期:2010-03-20
基金资助:
国家科技部星火计划项目;广东省产学研重大项目

The Establishment of RAPD Reaction Program of Chinese Kale

Received:2009-10-27 Revised:2009-11-19 Online:2010-03-20 Published:2010-03-20

摘要/Abstract

摘要：

利用改良的CTAB方法从芥蓝叶片中提取高质量的DNA。在参考一般RAPD分析反应程序的基础上，经过优化试验，确定适合芥蓝PCR扩增体系（总体积25μL）为：25mmol/LMgCl2 2.0μL、10×PCR Buffer 2.5μL、2.5mmol/L dNTPs2.0μL、5U/μLTaq酶0.25μL、5μmol/ L 引物1.2μL、模板DNA 25ng、灭菌双蒸水12.25μl。PCR扩增程序为：94℃预变性5min，94℃变性1min，36℃退火1min，72℃延伸2min，40个循环，72℃延伸10min。

关键词: 亚种间杂交水稻, 亚种间杂交水稻, 特优627, 选育, 高产栽培, 高产制种

Abstract:

High quality DNA was obtained from Chinese Kale (Brassica alboglabra Bailey） leaf by the improved method of CTAB．Based on the common RAPD reaction program and the adjusting experiments，the optimal PCR system（25μl total volumes）contains：5mmol/LMgCl2 2.0μL, 10×PCR Buffer 2.5μL, 2.5mmol/L dNTPs2.0μL, 5U/μLTaq DNA polymerase 0.25μL, 5μmol/ L primer1.2μL、genomic DNA 25ng and ddH2O 12.25μl. The optimal amplification program as follows：94℃ for 5 min；40 cycles at 94℃ for 1 min，36℃ for 1 min and 72℃ for 2 min；72℃ for 10 min at last.

陈文文,刘厚诚,陈日远,宋世威,孙光闻. 芥蓝RAPD反应体系的建立[J]. 中国农学通报, 2010, 26(6): 22-25.

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