百蕊草药材中5种黄酮类化学成分的含量测定

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb2021-0737

中国农学通报 ›› 2022, Vol. 38 ›› Issue (5): 30-36.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb2021-0737

所属专题：生物技术；园艺

百蕊草药材中5种黄酮类化学成分的含量测定

郑玲玲¹(), 纪瑞锋², 韩红亮², 罗旖璐², 罗嘉仪², 管悦琴³, 姚其盛³, 郑卫兵³, 陈美兰¹, 周修腾¹()

¹中国中医科学院中药资源中心/道地药材国家重点实验室培育基地,北京 100700
²广东药科大学中药学院,广州 510006
³安徽九华华源药业有限公司,安徽滁州 239000

收稿日期:2021-08-05 修回日期:2021-10-18 出版日期:2022-02-15 发布日期:2022-03-17
通讯作者: 周修腾
作者简介:郑玲玲,女,1994年出生,河南商丘人,硕士,主要从事中药质量评价与新药研发方面的研究。通信地址：100700 北京市东城区东直门内南小街16号中国中医科学院中药资源中心,E-mail： zhenglingling1994@163.com。
基金资助:
中央本级重大增减支项目“名贵中药资源可持续利用能力建设”(2060302);国家自然科学基金青年科学基金项目(81803658)

Determination of Five Kinds of Flavonoids in the Medicinal Herbs of Thesium chinensis

ZHENG Lingling¹(), JI Ruifeng², HAN Hongliang², LUO Yilu², LUO Jiayi², GUAN Yueqin³, YAO Qisheng³, ZHENG Weibing³, CHEN Meilan¹, ZHOU Xiuteng¹()

¹China Academy of Chinese Medical Sciences, National Resource Center for Chinese Material Medical/ State Key Laboratory Breeding Base of Dao-di Herbs, Beijing 100700
²School of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006
³Anhui Jiuhua Huayuan Pharmaceutical Co., Ltd., Chuzhou, Anhui 239000

Received:2021-08-05 Revised:2021-10-18 Online:2022-02-15 Published:2022-03-17
Contact: ZHOU Xiuteng

摘要/Abstract

摘要：

为了揭示野生与人工栽培百蕊草5种黄酮类化学成分含量的差异,本研究采用液相色谱分析方法测定百蕊草中百蕊草素Ⅰ、山奈酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、山奈酚-7-O-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量。结果表明百蕊草素Ⅰ、山奈酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、山奈酚-7-O-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷线性范围分别为10~1000(0.9995)、1~200(0.9992)、1~200(0.9995)、1~200(0.9994)、10~2000 µg/mL(0.9998);精密度、稳定性及重复性试验的RSD为0.17%~3%;平均加样回收率为91.99%~107.40%,RSD均小于3.24%。与野生百蕊草相比,人工栽培百蕊草中百蕊草素Ⅰ、紫云英苷、山奈酚-7-O-葡萄糖苷及芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷含量均显著(P<0.05)高于野生百蕊草,而山奈酚-3-O-芸香糖苷含量有高于野生百蕊草趋势,但是并无显著性差异。本研究表明该方法操作重复性好、准确、简便,可同时测定野生与人工种植百蕊草中5个黄酮类化学成分的含量,建议推广使用。

关键词: 百蕊草, 黄酮类化学成分, 超高效液相, 野生与栽培, 正交试验

Abstract:

To reveal the differences in the contents of five kinds of flavonoids between wild and cultivated Thesium chinensis, the contents of Kaempferol-3-O-rhamnose(1-2)glucoside, Kaempferol -3-O- rutinoside, Astragaline, Kaempferol-7-glucoside and Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside in Thesium chinensis were determined by Ultra-High Performance Liquid Phase. The results showed that the linear ranges of Kaempferol-3-O-rhamnose(1-2)glucoside, Kaempferol -3-O- rutinoside, Astragaline, Kaempferol-7-glucoside and Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside were 10-1000 (0.9995), 1-200 (0.9992), 1-200 (0.9995), 1-200 (0.9994), 10-2000 g/mL (0.9998), respectively; RSD of precision, stability and reproducibility tests was 0.17%~3%. The average recoveries of the five kinds of flavonoids were 91.99%~107.40% with RSD less than 3.24%. Compared with that of the wild Thesium chinensis, the contents of Kaempferol-3-O-rhamnose(1-2)glucoside, Astragaline, Kaempferol-7-glucoside and Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside in cultivated Thesium chinensis were significantly higher (P<0.05), and the content of Kaempferol -3-O- rutinoside tended to be higher but showed no significant difference. This study shows that the method has good repeatability, accuracy and simplicity. It can determine the contents of the five kinds of flavonoids in wild and cultivated Thesium chinensis at the same time, and is recommended to be popularized.

Key words: Thesium chinensis, flavonoids chemical constituents, Ultra-High Performance Liquid Phase, wild and cultivated, orthogonal test

中图分类号:

S567.23

郑玲玲, 纪瑞锋, 韩红亮, 罗旖璐, 罗嘉仪, 管悦琴, 姚其盛, 郑卫兵, 陈美兰, 周修腾. 百蕊草药材中5种黄酮类化学成分的含量测定[J]. 中国农学通报, 2022, 38(5): 30-36.

ZHENG Lingling, JI Ruifeng, HAN Hongliang, LUO Yilu, LUO Jiayi, GUAN Yueqin, YAO Qisheng, ZHENG Weibing, CHEN Meilan, ZHOU Xiuteng. Determination of Five Kinds of Flavonoids in the Medicinal Herbs of Thesium chinensis[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2022, 38(5): 30-36.

图/表 10

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水平	A（料液比）	B（时间/min）	C（溶剂比例/%）
1	1：10	30	40
2	1：20	45	60
3	1：30	60	80

水平	A（料液比）	B（时间/min）	C（溶剂比例/%）
1	1：10	30	40
2	1：20	45	60
3	1：30	60	80

处理	A	B	C	总黄酮类含量/(mg/g)
1	1	1	1	54.47
2	1	2	2	57.63
3	1	3	3	55.44
4	2	1	2	30.95
5	2	2	3	30.22
6	2	3	1	30.55
7	3	1	3	12.61
8	3	2	1	12.20
9	3	3	2	13.52
K1	167.54	98.03	97.23	-
K2	91.72	100.04	102.10	-
K3	38.33	99.52	98.26	-
k1	55.85	32.68	32.41	-
k2	30.57	33.35	34.03	-
k3	12.78	33.17	32.75	-
极差R	43.07	0.49	1.62	-
主次顺序	A>C>B			-
优水平	A₁	B₂	C₂	-
优组合	A₁B₂C₂			-

处理	A	B	C	总黄酮类含量/(mg/g)
1	1	1	1	54.47
2	1	2	2	57.63
3	1	3	3	55.44
4	2	1	2	30.95
5	2	2	3	30.22
6	2	3	1	30.55
7	3	1	3	12.61
8	3	2	1	12.20
9	3	3	2	13.52
K1	167.54	98.03	97.23	-
K2	91.72	100.04	102.10	-
K3	38.33	99.52	98.26	-
k1	55.85	32.68	32.41	-
k2	30.57	33.35	34.03	-
k3	12.78	33.17	32.75	-
极差R	43.07	0.49	1.62	-
主次顺序	A>C>B			-
优水平	A₁	B₂	C₂	-
优组合	A₁B₂C₂			-

时间	百蕊草素Ⅰ	山奈酚-3-O-芸香糖苷	紫云英苷	山奈酚-7-O-葡萄糖苷	芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷
0 h	241038	735751	1105893	966690	818366
2 h	241317	736991	1100699	956951	796866
4 h	239491	738547	1099682	949044	785764
6 h	240620	742233	1103086	952031	782291
8 h	240758	740530	1102185	948159	780462
12 h	241578	743330	1101669	950669	781987
15 h	242782	744139	1102968	950242	778583
24 h	242512	762303	1089273	965917	774134
RSD/%	0.44	1.13	0.45	0.78	1.8

百蕊草药材中5种黄酮类化学成分的含量测定

Determination of Five Kinds of Flavonoids in the Medicinal Herbs of Thesium chinensis

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百蕊草化学成分	回归方程	线性范围/(µg/mL)	回归系数r
百蕊草素Ⅰ	y=1148.9x+14942	10-1000	0.9995
山奈酚-3-O-芸香糖苷	y=4539.8x+7932.5	1-200	0.9992
紫云英苷	y=5664x-18270	1-200	0.9995
山奈酚-7-O-葡萄糖苷	y=5881.1x-21385	1-200	0.9994
芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷	y=4446x+28772	10-2000	0.9998

百蕊草化学成分	RSD/%
百蕊草素Ⅰ	0.76
山奈酚-3-O-芸香糖苷	1.25
紫云英苷	0.9
山奈酚-7-O-葡萄糖苷	0.81
芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷	0.17

百蕊草化学成分	RSD/%
百蕊草素Ⅰ	1.75
山奈酚-3-O-芸香糖苷	2.51
紫云英苷	2.84
山奈酚-7-O-葡萄糖苷	2.62
芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷	1.9

百蕊草化学成分	对照品浓度	回收率/%	RSD/%
百蕊草素Ⅰ	高	101.87	3.24
	中	97.30	2.58
	低	98.25	1.99
山奈酚-3-O-芸香糖苷	高	107.40	1.56
	中	98.02	2.35
	低	92.34	2.47
紫云英苷	高	97.69	1.78
	中	91.99	2.79
	低	93.57	1.65
山奈酚-7-O-葡萄糖苷	高	96.54	1.11
	中	98.51	2.87
	低	93.26	2.49
芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷	高	99.31	1.51
	中	94.43	1.39
	低	95.19	2.61

处理		百蕊草素Ⅰ	山奈酚-3-O-芸香糖苷	紫云英苷	山奈酚-7-O-葡萄糖苷	芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷
人工	地上	12.98±0.44aA	0.26±0.01aA	0.28±0.01aA	0.84±0.02aA	17.38±0.65aA
人工	地下	1.44±0.17bC	0.02±0.02bA	0.07±0.02bC	0.1±0.02bC	0.84±0.1bC
野生	地上	8.28±0.31cB	0.2±0.09cA	0.2±0.04cB	0.29±0.06cB	3.5±0.02cB
野生	地下	2.43±0.14dD	0.05±0.05dA	0.15±0.05cD	0.11±0.06dD	0.57±0.08dD

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时间/min	乙腈/%	0.5%甲酸水/%
0	5	95
1	5	95
8	13	87
11	14	86
12	15	85
14	5	95
15	5	95

时间/min	乙腈/%	0.5%甲酸水/%
0	5	95
1	5	95
8	13	87
11	14	86
12	15	85
14	5	95
15	5	95