中国农学通报 ›› 2023, Vol. 39 ›› Issue (31): 44-49.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb2022-0549
收稿日期:
2022-07-07
修回日期:
2023-01-09
出版日期:
2023-11-05
发布日期:
2023-10-31
通讯作者:
胡新军,男,1970年出生,湖南宁乡人,研究员,学士,研究方向:蔬菜遗传育种与栽培技术研究。通信地址:410125 湖南省长沙市芙蓉区马坡岭省农科院蔬菜所开发楼503,Tel:0731-84690076,E-mail:120780658@qq.com。
作者简介:
韩小霞,女,1979年出生,山东潍坊人,副研究员,博士研究生,研究方向:蔬菜遗传育种与分子生物学研究。通信地址:410125 湖南省长沙市芙蓉区马坡岭省农科院蔬菜所开发楼503,Tel:0731-84690076,E-mail:xiaoxiahanhan@163.com。
基金资助:
HAN Xiaoxia(), MIN Ziyang, LI Yongqi, YUAN Zuhua, HU Xinjun(
)
Received:
2022-07-07
Revised:
2023-01-09
Published-:
2023-11-05
Online:
2023-10-31
摘要:
为保障‘兴蔬早佳’丝瓜杂交种的纯度,需建立一套安全可靠、简单快速的杂交种纯度鉴定方法。本研究利用简化的SSR分子标记技术,以‘兴蔬早佳’丝瓜品种杂交种及其父母本为试材,从50对SSR引物中筛选出1对能稳定扩增杂交种与其亲本,且扩增产物呈共显性的引物。利用该引物对不同地点生产的‘兴蔬早佳’杂交种进行纯度鉴定,结果与田间表型鉴定结果误差小于1.2%。研究获得1对适于鉴定‘兴蔬早佳’杂交种纯度的引物,建立了一套适于该品种种子纯度鉴定的简便方法。利用该引物对‘兴蔬早佳’丝瓜杂交种种子纯度进行鉴定,不仅节约了鉴定成本,更缩短了鉴定周期,可为该品种商品种的安全销售提供技术保障。
韩小霞, 闵子扬, 李勇奇, 袁祖华, 胡新军. 利用简便SSR法鉴定‘兴蔬早佳’丝瓜杂交种纯度[J]. 中国农学通报, 2023, 39(31): 44-49.
HAN Xiaoxia, MIN Ziyang, LI Yongqi, YUAN Zuhua, HU Xinjun. Rapid Identification of ‘Xingshu Zaojia’ Luffa Hybrid Purity by SSR Molecular Markers[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2023, 39(31): 44-49.
引物编号 | 5'-3'正向引物序列 | 3'-5'正向引物序列 | ||
---|---|---|---|---|
S01 | CTCCCTCTTTCCCTCACTCC | GACAGGACCGTTAACCCAAA | ||
S02 | TAAATACCCGCCTCGAACAC | TCCATCCCAGATTTTGCTTC | ||
S03 | GGGAGAACAAGATAGCCCAA | TGCAAACTTCGATTTGCTCA | ||
S04 | CAGCTCTACAACAACATCTC | ATCATTGGATGTGGGATTCTC | ||
S05 | AAGATTGAAGTGGGAAAATG | CGGCAATCATCTTATCTTTC | ||
S06 | TGGAGTGTTGACATTGTTTTCA | GGTTGGAGTAAGCCAAATTACA | ||
S07 | TTGAAGATGAAGCCGGAGTT | CTAGAGTCAGATGCCTCGCC | ||
S08 | AGAATAAGGTCCACATAAGG | GTTAAAGGCTATGGTATAGAAC | ||
S09 | CAGCTCTACAACAACATCTC | ATCCAACTCGACCAAGAAAC | ||
S10 | ACTCAATCCAACCCACGAATAG | TGGCATTTGAACGCTAAGTTG | ||
S11 | TTCGCCTCAGTCCATCTAGTTT | ATGTCGTACCTTTTCCCCTTTT | ||
S12 | TTTGAATCTCGCCATGAAG | CTACCCTGTTTTGCAGCTACG | ||
S13 | CTCCTCAAGAAAATCCACTTCC | CCAGGTAATTCTCCTCCATGTC | ||
S14 | TATTGCCCCAAACTCTTCTCTC | ATGGACAAAACTTCATAACGCC | ||
S15 | GAAGTTTGAGAAGGGGTTTCAG | TTCTTCCCTATCCATCATCACC | ||
S16 | TTCCCCATCCATACATTTCTTC | CCCTCTCTTCTCCATTTTCTCA | ||
S17 | GGCGGAATACAAGAAAGATACC | CATGTGAAAAGGGAACAGAGAA | ||
S18 | CCAACTATCACCCCTACAATCA | GGACAGAACCTAAAAGAAAGAAGAG | ||
S19 | GTCTTCCTGAGAGCTTTTGCAT | CCCTCTTCTCCTTCGATCTTCT | ||
S20 | AACCTCTCGTCATTACTACCGC | GTGACTAAAAGCGTGTGAGTGG | ||
S21 | CGTTTGAGATGTGTGCATGTAG | TTAAGAGACTGGTTGGAGTTGAGA | ||
S22 | TACCTTCACCCAACTCGCTATT | GTGTGTGTTTGATCGGCTGTT | ||
S23 | TTTGTTCTATTCCCCTCTTCCA | TCGATTACGACGACTTTCTTGA | ||
S24 | TCAGGAAGTGGAGACAACACC | GGGAAAAGACTGCACCATCA | ||
S25 | GCTCTCGATTCTAACCAAAACC | TCATTCTACCTCTCCAATTCCA | ||
S26 | ACATTTTCACTAGCAGAAGGGG | GTGCCCATGTATAGGAAGCAA | ||
S27 | GAAAGAAGGCGAGGAGTGTAGA | GAAAAGGAAAGTTGGGGTGTTT | ||
S28 | TTTGGGCTCTGACATTAGATGA | ACACCTTTGGGAGATAACAAGC | ||
S29 | CTCCAAGGAAGAAGAAGAAACC | AATACTGCCACATCATCAGCTC | ||
S30 | GGAGGAGGGAAGAGGAGATG | AGGTAAAGCAACAACCCCATAA | ||
S31 | GTCGCCACCGTTGAGTTT | AACCTTAATCCGGCTAGGAAAG | ||
S32 | CATCACCACCACCACAACC | GCCACCAAAATCAGCTCTATG | ||
S33 | AGAAGTGGGAGATTGAACATGC | GTTGGTATGTGAACCTTGAGGC | ||
S34 | TCCACCAACTCTCACTTTCCTT | GCATATCCCCAAAACGAACTAA | ||
S35 | AAGACAAATTAAGGAGGGGAGG | TAAGACGAGCGTAATGGTTGAC | ||
S36 | TTCTTTCTCCTTCGCTGTCTTC | GGGATGATGATATTCGGAGCTA | ||
S37 | CCACCCCATTTCATACACAATA | CATTCAACCTAAGAGCGAGTGA | ||
S38 | AATTTTATGGACCTCATTCCCC | TTTACCAAACCCAATTCTAGCC | ||
S39 | GTTTGTTGGAATTAGGGTGGAG | CTTTGGGAGGAGATTGATTTTG | ||
S40 | TACCGATGCTCTGTTCTTGCTA | TTCCCACTTCATTGTCCAAAGT | ||
S41 | TGAGAGAGAAACATTGGGACCT | ATGAGAGATTTGACTTGGGGAA | ||
S42 | TGGCTAATTGGGTGAGCTACAG | TGGTGGAAGTGTTACTGTGTGTG | ||
S43 | CTAGCCACCTCTGATATGCAAC | GTCCTACCCCTTATGACTATTTTGT | ||
S44 | AACATGGGATAAAACGGACATC | AGTTGCCGCTGTTTGAGTAAGT | ||
S45 | AACAAACGCATAGGAGAAGAGC | TCAGGGGAAACTGATTTATTGC | ||
S46 | CAATCTCAAACCCAAGTTCCAG | AACAGAATGGTGAGGCAGATG | ||
S47 | ACTATAAGAACGTGCAGGCCAT | GAAGAAAGCTAATGTTGGTCGG | ||
S48 | GGGCTTCACCACACATTTCT | GAACAAGGGAAGATTTAGGTCAAC | ||
S49 | TATAATGGTCCCACTGAAAGCC | CATTCCAGCACCTACAGCTTC | ||
S50 | TATAATGGTCCCACTGAAAGCC | CATTCCAGCACCTACAGCTTC |
引物编号 | 5'-3'正向引物序列 | 3'-5'正向引物序列 | ||
---|---|---|---|---|
S01 | CTCCCTCTTTCCCTCACTCC | GACAGGACCGTTAACCCAAA | ||
S02 | TAAATACCCGCCTCGAACAC | TCCATCCCAGATTTTGCTTC | ||
S03 | GGGAGAACAAGATAGCCCAA | TGCAAACTTCGATTTGCTCA | ||
S04 | CAGCTCTACAACAACATCTC | ATCATTGGATGTGGGATTCTC | ||
S05 | AAGATTGAAGTGGGAAAATG | CGGCAATCATCTTATCTTTC | ||
S06 | TGGAGTGTTGACATTGTTTTCA | GGTTGGAGTAAGCCAAATTACA | ||
S07 | TTGAAGATGAAGCCGGAGTT | CTAGAGTCAGATGCCTCGCC | ||
S08 | AGAATAAGGTCCACATAAGG | GTTAAAGGCTATGGTATAGAAC | ||
S09 | CAGCTCTACAACAACATCTC | ATCCAACTCGACCAAGAAAC | ||
S10 | ACTCAATCCAACCCACGAATAG | TGGCATTTGAACGCTAAGTTG | ||
S11 | TTCGCCTCAGTCCATCTAGTTT | ATGTCGTACCTTTTCCCCTTTT | ||
S12 | TTTGAATCTCGCCATGAAG | CTACCCTGTTTTGCAGCTACG | ||
S13 | CTCCTCAAGAAAATCCACTTCC | CCAGGTAATTCTCCTCCATGTC | ||
S14 | TATTGCCCCAAACTCTTCTCTC | ATGGACAAAACTTCATAACGCC | ||
S15 | GAAGTTTGAGAAGGGGTTTCAG | TTCTTCCCTATCCATCATCACC | ||
S16 | TTCCCCATCCATACATTTCTTC | CCCTCTCTTCTCCATTTTCTCA | ||
S17 | GGCGGAATACAAGAAAGATACC | CATGTGAAAAGGGAACAGAGAA | ||
S18 | CCAACTATCACCCCTACAATCA | GGACAGAACCTAAAAGAAAGAAGAG | ||
S19 | GTCTTCCTGAGAGCTTTTGCAT | CCCTCTTCTCCTTCGATCTTCT | ||
S20 | AACCTCTCGTCATTACTACCGC | GTGACTAAAAGCGTGTGAGTGG | ||
S21 | CGTTTGAGATGTGTGCATGTAG | TTAAGAGACTGGTTGGAGTTGAGA | ||
S22 | TACCTTCACCCAACTCGCTATT | GTGTGTGTTTGATCGGCTGTT | ||
S23 | TTTGTTCTATTCCCCTCTTCCA | TCGATTACGACGACTTTCTTGA | ||
S24 | TCAGGAAGTGGAGACAACACC | GGGAAAAGACTGCACCATCA | ||
S25 | GCTCTCGATTCTAACCAAAACC | TCATTCTACCTCTCCAATTCCA | ||
S26 | ACATTTTCACTAGCAGAAGGGG | GTGCCCATGTATAGGAAGCAA | ||
S27 | GAAAGAAGGCGAGGAGTGTAGA | GAAAAGGAAAGTTGGGGTGTTT | ||
S28 | TTTGGGCTCTGACATTAGATGA | ACACCTTTGGGAGATAACAAGC | ||
S29 | CTCCAAGGAAGAAGAAGAAACC | AATACTGCCACATCATCAGCTC | ||
S30 | GGAGGAGGGAAGAGGAGATG | AGGTAAAGCAACAACCCCATAA | ||
S31 | GTCGCCACCGTTGAGTTT | AACCTTAATCCGGCTAGGAAAG | ||
S32 | CATCACCACCACCACAACC | GCCACCAAAATCAGCTCTATG | ||
S33 | AGAAGTGGGAGATTGAACATGC | GTTGGTATGTGAACCTTGAGGC | ||
S34 | TCCACCAACTCTCACTTTCCTT | GCATATCCCCAAAACGAACTAA | ||
S35 | AAGACAAATTAAGGAGGGGAGG | TAAGACGAGCGTAATGGTTGAC | ||
S36 | TTCTTTCTCCTTCGCTGTCTTC | GGGATGATGATATTCGGAGCTA | ||
S37 | CCACCCCATTTCATACACAATA | CATTCAACCTAAGAGCGAGTGA | ||
S38 | AATTTTATGGACCTCATTCCCC | TTTACCAAACCCAATTCTAGCC | ||
S39 | GTTTGTTGGAATTAGGGTGGAG | CTTTGGGAGGAGATTGATTTTG | ||
S40 | TACCGATGCTCTGTTCTTGCTA | TTCCCACTTCATTGTCCAAAGT | ||
S41 | TGAGAGAGAAACATTGGGACCT | ATGAGAGATTTGACTTGGGGAA | ||
S42 | TGGCTAATTGGGTGAGCTACAG | TGGTGGAAGTGTTACTGTGTGTG | ||
S43 | CTAGCCACCTCTGATATGCAAC | GTCCTACCCCTTATGACTATTTTGT | ||
S44 | AACATGGGATAAAACGGACATC | AGTTGCCGCTGTTTGAGTAAGT | ||
S45 | AACAAACGCATAGGAGAAGAGC | TCAGGGGAAACTGATTTATTGC | ||
S46 | CAATCTCAAACCCAAGTTCCAG | AACAGAATGGTGAGGCAGATG | ||
S47 | ACTATAAGAACGTGCAGGCCAT | GAAGAAAGCTAATGTTGGTCGG | ||
S48 | GGGCTTCACCACACATTTCT | GAACAAGGGAAGATTTAGGTCAAC | ||
S49 | TATAATGGTCCCACTGAAAGCC | CATTCCAGCACCTACAGCTTC | ||
S50 | TATAATGGTCCCACTGAAAGCC | CATTCCAGCACCTACAGCTTC |
样品 | SSR法鉴定 | 田间鉴定 | SSR法鉴定与田间鉴定差异/% | |||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
检测数 | 假杂种数 | 种子纯度/% | 检测数 | 假杂种数 | 种子纯度/% | |||
高桥样品1 | 190 | 1 | 99.47 | 190 | 1 | 99.5 | 0 | |
双峰样品1 | 190 | 0 | 100 | 94 | 0 | 100 | 0 | |
双峰样品2 | 94 | 2 | 98 | 94 | 3 | 97 | 1 | |
双峰样品3 | 94 | 0 | 100 | 94 | 1 | 98.94 | 1.06 | |
双峰样品4 | 94 | 2 | 98 | 94 | 2 | 98 | 0 | |
新疆样品1 | 190 | 2 | 98.95 | 94 | 1 | 99 | 0.05 | |
新疆样品2 | 94 | 2 | 98 | 94 | 2 | 98 | 0 | |
新疆样品3 | 94 | 3 | 96.80 | 94 | 2 | 98 | 1.2 |
样品 | SSR法鉴定 | 田间鉴定 | SSR法鉴定与田间鉴定差异/% | |||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
检测数 | 假杂种数 | 种子纯度/% | 检测数 | 假杂种数 | 种子纯度/% | |||
高桥样品1 | 190 | 1 | 99.47 | 190 | 1 | 99.5 | 0 | |
双峰样品1 | 190 | 0 | 100 | 94 | 0 | 100 | 0 | |
双峰样品2 | 94 | 2 | 98 | 94 | 3 | 97 | 1 | |
双峰样品3 | 94 | 0 | 100 | 94 | 1 | 98.94 | 1.06 | |
双峰样品4 | 94 | 2 | 98 | 94 | 2 | 98 | 0 | |
新疆样品1 | 190 | 2 | 98.95 | 94 | 1 | 99 | 0.05 | |
新疆样品2 | 94 | 2 | 98 | 94 | 2 | 98 | 0 | |
新疆样品3 | 94 | 3 | 96.80 | 94 | 2 | 98 | 1.2 |
[1] |
胡新军, 蒋宏华, 李勇奇. 湖南地区丝瓜品种应用现状与潜力品种推荐[J]. 长江蔬菜, 2010, 13:5-7.
|
[2] |
|
[3] |
单承莺, 马世宏, 徐悦, 等. 丝瓜在天然化妆品中的应用研究[J]. 中国野生植物资源, 2016, 35(5):74-77.
|
[4] |
邵兴云. 丝瓜的生物学特性和开发利用[J]. 生物学通报, 2004, 39(5):9-10.
|
[5] |
杨花, 高昂, 赵兵, 等. 丝瓜络药学研究概况[J]. 安徽农业科学, 2011, 39(34):20990-20991.
|
[6] |
马双伍. 苗期标记性状在我国作物育种及种子纯度鉴定上的研究应用进展[J]. 植物遗传资源学报, 2011, 12(2):297-300.
doi: 10.13430/j.cnki.jpgr.2011.02.020 |
[7] |
纪颖彪, 朱其杰. 同工酶分析在黄瓜杂种一代纯度检测上的应用研究[J]. 园艺学报, 1995, 22(3):251-255.
|
[8] |
王贵余. 利用电泳谱带法鉴定蔬菜品种纯度的研究[J]. 西北农业学报, 2005, 14(4):100-102,112.
|
[9] |
陈卫江, 王同华, 曲亮, 等. 利用种子醇溶蛋白快速鉴定油菜杂交种纯度的方法研究[J]. 湖南农业科学, 2008(6):11-13,27.
|
[10] |
张应华, 刘荣, 许彬. 分子标记在蔬菜作物上的应用[J]. 云南农业大学学报, 2002, 3(17):287-290.
|
[11] |
刘爱群, 赵丽丽, 王国政, 等. 分子标记鉴定葫芦科瓜类作物种子纯度的研究进展[J]. 长江蔬菜, 2012(8):6-10.
|
[12] |
辛业芸, 张展, 熊易平, 等. 应用SSR分子标记鉴定超级杂交水稻组合及其纯度[J]. 中国水稻科学, 2005, 19(2):95-100.
|
[13] |
吴明生, 贾希海, 田雷, 等. 利用SSR技术快速准确鉴定杂交玉米种子纯度[J]. 分子植物育种, 2006, 4(3):381-384.
|
[14] |
徐营莉, 华德平, 张红, 等. 白菜类蔬菜种子纯度SSR分子标记鉴定[J]. 分子植物育种, 2020, 18(1):187-192.
|
[15] |
陈曦, 黄铭奇, 陈铣, 等. ISSR分子标记在丝瓜杂交种纯度鉴定的应用[J]. 分子植物育种, 2021, 19(6):1928-1932.
|
[16] |
朱海生, 李祖亮, 李永平, 等. 基于SSR分子标记的普通丝瓜杂交种子纯度鉴定[J]. 江苏农业科学, 2020, 48(8):53-55.
|
[17] |
刘军, 许美荣, 赵志伟, 等. 丝瓜种质资源遗传多样性SSR和SRAP分析[J]. 中国瓜菜, 2010, 48(8):53-55.
|
[18] |
|
[19] |
韩小霞, 粟建文, 胡新军, 等. 一种简便的南瓜杂交种纯度SSR鉴定方法[J]. 中国农学通报, 2014, 30(7):194-197.
|
[20] |
李楠, 张海英, 陈年末, 等. 三种瓜类作物SSR扩增的通用性与多态性分析[J]. 华北农学报, 2008, 23(4):110-114.
doi: 10.7668/hbnxb.2008.04.026 |
[21] |
宋金亮, 杨路明, 郭禄芹, 等. 甜瓜SSR标记在葫芦科不同作物间的通用性分析[J]. 分子植物育种, 2018, 16(12):3980-3988.
|
[22] |
唐鑫, 张海英, 许勇, 等. 西瓜和甜瓜的SSR引物对三种瓜类作物的通用性分析[J]. 分子植物育种, 2011, 9(6):760-764.
|
[23] |
赵胜杰, 刘文革, 阎志红, 等. 葫芦科主要瓜类作物EST-SSR标记的开发与应用[J]. 生物技术通报, 2011(10):72-76.
|
[24] |
王春蕾, 朱子成, 盛云燕. 利用甜瓜SSR标记分析常见葫芦科作物亲缘关系[J]. 中国园艺文摘, 2011(12):23-53.
|
[25] |
刘鹏, 吴海斌, 龚浩, 等. 利用黄瓜、甜瓜和西瓜 SSR 开发葫芦科作物穿梭标记[J]. 分子植物育种, 2014, 12(6):1201-1208.
|
[26] |
李婧婧, 付求来, 戴继侠, 等. 一种快速鉴定杂交水稻种子纯度的方法[J]. 种子, 2018, 37(4):125-126,131.
|
[27] |
纪伟. 简化SSR体系在小麦品种纯度检测中的应用[D]. 呼和浩特: 内蒙古农业大学, 2007:27-34.
|
[28] |
王同华, 曲亮, 李莓. 一种快速的油菜杂交种纯度SSR鉴定方法[J]. 湖南农业科学, 2012, 10(2):245-249.
|
[1] | 邵雪花, 赖多, 肖维强, 刘传和, 贺涵, 匡石滋. 番石榴遗传多样性的ISSR分析及指纹图谱构建[J]. 中国农学通报, 2023, 39(21): 39-47. |
[2] | 郭栋梁, 黄石连, 王静, 韩冬梅, 李建光. 基于SSR分子标记的龙眼种质资源遗传多样性分析及其指纹图谱构建[J]. 中国农学通报, 2022, 38(36): 67-73. |
[3] | 赵雅儒, 邳植, 刘蕊, 马语嫣, 吴则东. 不同甜菜单胚细胞质雄性不育系与保持系的遗传多样性分析[J]. 中国农学通报, 2022, 38(30): 35-40. |
[4] | 黄树苹, 谈杰, 陈霞, 张洪源, 张敏. 普通丝瓜果皮颜色性状的遗传研究[J]. 中国农学通报, 2021, 37(25): 58-63. |
[5] | 徐明, 汪琼, 李冬玲, 郑玉红, 徐增莱. 基于ISSR标记的5个蓼蓝居群遗传多样性分析[J]. 中国农学通报, 2021, 37(21): 134-139. |
[6] | 许凤, 宋杰, 张艺萍, 张宝琼, 杨秀梅, 张丽芳, 王丽花, 解玮佳. 22个常绿杜鹃远缘杂交种子萌发特性[J]. 中国农学通报, 2020, 36(14): 64-68. |
[7] | 李浩川,付志远,谭晓军,丁 冬,李卫华,贾文华,汤继华,刘宗华. 新型玉米杂交种‘豫单112’的特异性分析[J]. 中国农学通报, 2018, 34(35): 7-12. |
[8] | 王希,陈丽,赵春雷,李彦丽. 表型与分子标记相结合分析130份糖用甜菜种质的遗传多样性[J]. 中国农学通报, 2018, 34(30): 26-36. |
[9] | 卫 笑,杨 靖,孙海燕,曹银萍,巴爱丽,李友勇. 筛选一组用于鉴定小麦缺体-四体真实性的SSR分子标记[J]. 中国农学通报, 2018, 34(20): 47-54. |
[10] | 黄树苹,张 敏,谈 杰,王春丽,陈 霞,张洪源,谈太明. 普通丝瓜果肉褐变程度的主基因+多基因遗传模型分析[J]. 中国农学通报, 2018, 34(19): 50-56. |
[11] | 李 艳,赵红星,王 勇,姜 俊,魏小春,田士林. 辣椒全基因组SSR标记多态性的筛选及应用[J]. 中国农学通报, 2018, 34(17): 56-61. |
[12] | 赵光伟,徐永阳. SSR 标记对甜瓜杂交种‘众天翠雪’纯度的鉴定[J]. 中国农学通报, 2017, 33(9): 37-40. |
[13] | 刘建汀,朱海生,庄尹宏,温庆放,叶新如,王彬,陈敏氡,张前荣,薛珠政. 普通丝瓜褐变度概率分级与总酚的回归分析[J]. 中国农学通报, 2017, 33(24): 124-128. |
[14] | 钟开勤,曾小玲,朱朝辉,陈文辉,赵瑞丽. “福春1号”大白菜一代杂种纯度的SRAP鉴定[J]. 中国农学通报, 2017, 33(20): 50-54. |
[15] | 戴茂华,刘丽英,吴振良. 优质高产耐盐抗旱杂交棉‘衡优12’的选育研究[J]. 中国农学通报, 2017, 33(18): 21-24. |
阅读次数 | ||||||
全文 |
|
|||||
摘要 |
|
|||||