草莓茎尖组培繁育体系优化及SRAP遗传稳定性检验

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb2022-1016

摘要/Abstract

摘要：

以组培苗遗传稳定和植株健壮为标准，优化草莓茎尖组培繁育体系，以期为草莓工厂化育苗提供科研和技术依据。以‘凤冠’和‘天仙醉’草莓为材料，设置植物生长调节剂浓度梯度，调整培养基基础配方，调查茎尖分化情况、增殖苗形态、增殖系数、生根苗叶片及根系等性状，并比对组培前后植株SRAP标记扩增条带的差异。筛选出初代培养基配方MS+ 6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.01 mg/L，增殖培养基配方MS+ 6-BA 0.3 mg/L+ NAA 0.01 mg/L，生根培养基配方1/2MS+硝酸钙0.45 g/L；组培前后植株DNA使用19对SRAP引物特异性扩增，得到的72个基因位点条带未发生变化，以上条带形成的DNA指纹没有差异。研究得到的草莓茎尖组培繁育体系具备植物生长调节剂种类少且浓度低、继代次数少、增殖系数低、组培时间短、组培苗健壮且基因稳定等特征。

关键词: 草莓, 茎尖, 组织培养, 相关序列扩增多态性标记, 基因稳定性

Abstract:

The aim of this study was to optimize strawberry tip-shoot tissue culture breeding system based on the genetic stability and robustness of tissue culture seedlings, and to provide scientific and technical basis for strawberry factory cultivation. Taking two main strawberry varieties of ‘Fengguan’ and ‘Tianxianzui’ as samples, the concentration gradient of plant growth regulator was set, the basic formula of medium was adjusted, and the tip-shoot differentiation, the morphology of proliferating seedlings, the proliferation coefficient, the leaf and root of rooting seedlings were investigated. The differences of the amplified bands of SRAP markers in plants before and after tissue culture were compared. The medium formula suitable for primary culture was MS+6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.01 mg/L. The medium formula for proliferation culture was MS+ 6-BA 0.3 mg/L+ NAA 0.01 mg/L. And the medium formula for rooting culture was 1/2MS+ calcium nitrate 0.45 g/L. 19 pairs of SRAP primers were used for specific amplification of plant DNA before and after tissue culture, the obtained 72 gene locus bands did not change, and there was no difference in DNA fingerprints formed by the above bands. The tip-shoot tissue culture breeding system of strawberry obtained in this study had the characteristics of few plant growth regulators and low concentration, low proliferation coefficient, short tissue culture time, robust seedling and stable gene.

Key words: strawberry, tip-shoot, tissue culture, sequence-related amplified polymorphism, genetic stability

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图/表 8

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品种名称	采样点	采样时间
天仙醉	陕西省西安市长安区草莓种植户	2021年11月25日
凤冠	陕西省西安市高陵区东张寺村	2021年11月26日

品种名称	采样点	采样时间
天仙醉	陕西省西安市长安区草莓种植户	2021年11月25日
凤冠	陕西省西安市高陵区东张寺村	2021年11月26日

处理编号	6-BA浓度/(mg/L)	NAA浓度/(mg/L)
1	0.5	0.01
2	0.5	0.05
3	0.5	0.10
4	0.5	0.20
5	0.5	0.30
6	1.0	0.01
7	1.0	0.05
8	1.0	0.10
9	1.0	0.20
10	1.0	0.30
11	2.0	0.01
12	2.0	0.05
13	2.0	0.10
14	2.0	0.20
15	2.0	0.30

处理编号	6-BA浓度/(mg/L)	NAA浓度/(mg/L)
1	0.5	0.01
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6	1.0	0.01
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11	2.0	0.01
12	2.0	0.05
13	2.0	0.10
14	2.0	0.20
15	2.0	0.30

引物方向	引物名称	引物序列(5’-3’)	引物方向	引物名称	引物序列(5’-3’)
正向	me1	TGAGTCCAAACCGGATA	反向	em1	GACTGCGTACGAATTAAT
	me2	TGAGTCCAAACCGGAGC		em2	GACTGCGTACGAATTGAC
	me3	TGAGTCCAAACCGGAAT		em3	GACTGCGTACGAATTTGA
	me4	TGAGTCCAAACCGGACC		em4	GACTGCGTACGAATTAAC
	me5	TGAGTCCAAACCGGAAG		em5	GACTGCGTACGAATTGCA
	me6	TGAGTCCAAACCGGTAA		em6	GACTGCGTACGAATTCAA
	me7	TGAGTCCAAACCGGTCC		em7	GACTGCGTACGAATTCTG
	me8	TGAGTCCAAACCGGTGC		em8	GACTGCGTACGAATTCGA