鹿茸基因组DNA提取方法的比较研究

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb20191100790

中国农学通报 ›› 2020, Vol. 36 ›› Issue (11): 26-32.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb20191100790

所属专题：生物技术

鹿茸基因组DNA提取方法的比较研究

杨重晖¹, 赵大庆¹, 宋文博², 尹程程¹, 何慧楠¹, 王秀阁³, 李芳宇², 杨洋¹, 荆礼⁴, 齐滨²()

¹长春中医药大学人参科学研究院,长春 130117
²长春中医药大学药学院,长春 130117
³长春中医药大学附属医院,长春 130117
⁴长春中医药大学创新实践中心,长春 130117

收稿日期:2019-11-07 修回日期:2019-11-28 出版日期:2020-04-15 发布日期:2020-04-28
通讯作者: 齐滨
作者简介:杨重晖,女,1995年出生,吉林四平人,硕士研究生,主要从事天然药物活性成分方面的研究。通信地址:130000 吉林省长春市净月经济开发区博硕路1035号,E-mail: m15526630200@163.com
基金资助:
国家中医药管理局国家中药标准化项目“鹿茸等3种中药饮片标准化建设”(ZYBZH-Y-JL-26);科技部,财政部国家重点研发计划“鹿茸质量评价方法研究”(2018YFC1706604-05)

Genomic DNA of Pilose Antler: Comparison of Extraction Methods

Yang Chonghui¹, Zhao Daqing¹, Song Wenbo², Yin Chengcheng¹, He Huinan¹, Wang Xiuge³, Li Fangyu², Yang Yang¹, Jing Li⁴, Qi Bin²()

¹Institute of Ginseng Science, Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117
²College of Pharmacy, Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117
³Changchun University of Traditional Chinese Medicine Affiliated Hospital, Changchun 130117
⁴Innovation Practice Center, Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117

Received:2019-11-07 Revised:2019-11-28 Online:2020-04-15 Published:2020-04-28
Contact: Qi Bin

摘要/Abstract

摘要：

本研究旨在建立一种稳定、高效的鹿茸药材DNA提取方法,以满足后续的鹿茸DNA条形码鉴定方法需求。采用2种试剂盒、改良的CTAB法以及SDS法对市场上5个厂家共8批次的鹿茸药材进行基因组DNA的提取,参考2015版《中华人民共和国药典》四部通则9107考察了样品量、水浴温度、水浴时间3个因素。实验结果表明4种方法均可以从鹿茸药材中提取出基因组DNA,其中天根试剂盒提取效果最佳,改良的CTAB法提取效果较差;通过方法学考察得出使用天根试剂盒,提取条件为样品量70 mg、水浴温度56℃,水浴时间6 h时提取效果最佳。本研究优化得到的天根试剂盒提取鹿茸DNA方法操作简便,提取DNA浓度、质量优良,能够用于后续的DNA条形码鉴定中。

关键词: 鹿茸, DNA提取, SDS, CTAB, 试剂盒

Abstract:

The objectives are to establish a stable and efficient method for extracting DNA from pilose antler and meet the needs of DNA barcode identification methods for pilose antler in the future. The genomic DNAs from 8 batches of velvet medicinal materials from 5 manufacturers on the market were extracted by two kinds of kits, modified CTAB method and SDS method. The three factors of sample size, water bath temperature and action time were investigated by referring to 9107 from the General Principles of Pharmacopoeia of the People's Republic of China (Ⅳ, 2015). The results showed that all methods could extract genomic DNAs from pilose antler. TIANamp Genomic DNA Kit got the best extraction, while the modified CTAB method had worse extraction. By methodological study, TIANamp Genomic DNA Kit had the best extraction with the extraction condition of the sample quantity for 70 mg, and the water bath temperature 56℃ for 6 h. TIANamp Genomic DNA Kit screened in this study can use simple and convenient method to extract and obtain excellent concentration and quality DNA, so it can be used for subsequent identification of DNA barcode in the future.

Key words: pilose antler, DNA extraction, SDS, CTAB, kit

中图分类号:

杨重晖, 赵大庆, 宋文博, 尹程程, 何慧楠, 王秀阁, 李芳宇, 杨洋, 荆礼, 齐滨. 鹿茸基因组DNA提取方法的比较研究[J]. 中国农学通报, 2020, 36(11): 26-32.

Yang Chonghui, Zhao Daqing, Song Wenbo, Yin Chengcheng, He Huinan, Wang Xiuge, Li Fangyu, Yang Yang, Jing Li, Qi Bin. Genomic DNA of Pilose Antler: Comparison of Extraction Methods[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2020, 36(11): 26-32.

图/表 14

编号	市场标签	产地	厂家	生产批号
1	梅花鹿茸粉片	吉林	吉林敖东世航药业股份有限公司	X1710024
2	梅花鹿茸	吉林	安国市东方药城中药材有限公司	170401
3	梅花鹿茸	吉林	安国市东方药城中药材有限公司	170403
4	梅花鹿茸三叉	吉林	安国圣山药业有限公司	170401
5	梅花鹿茸三叉	吉林	陕西医药控股集团派昂中药有限公司	170403
6	梅花鹿茸粉片	吉林	吉林敖东世航药业股份有限公司	X1710025
7	马鹿茸	吉林	河北益生膳中药材有限公司	170401
8	马鹿茸	吉林	河北益生膳中药材有限公司	170402

表1. 鹿茸样品信息

图1. 不同取样量对天恩泽试剂盒提取基因组DNA质量的影响

图2. 不同水浴温度对天恩泽试剂盒提取基因组DNA质量的影响

图3. 不同水浴时间对天恩泽试剂盒提取基因组DNA质量的影响

图4. 不同取样量对天根试剂盒提取基因组DNA质量的影响

图5. 不同水浴温度对天根试剂盒提取基因组DNA质量的影响

图6. 不同水浴时间对天根试剂盒提取基因组DNA质量的影响

图7. 不同取样量对改良的CTAB法提取基因组DNA质量的影响

图8. 不同水浴温度对改良的CTAB法提取基因组DNA质量的影响

图9. 不同水浴时间对改良的CTAB法提取基因组DNA质量的影响

图10. 不同取样量对SDS法提取基因组DNA质量的影响

图11. 不同水浴温度对SDS法提取基因组DNA质量的影响

图12. 不同水浴时间对SDS法提取基因组DNA质量的影响

样品编号	Con/(ng/μL)/A₂₆₀/A₂₈₀	样品编号	Con/(ng/μL)/A₂₆₀/A₂₈₀
1	2 219.31/1.94	11	958.15/1.93
2	1 906.17/1.94	12	272.76/1.93
3	540.37/1.91	13	1 540.89/1.94
4	107.81/1.80	14	1 103.42/1.92
5	1 674.00/1.94	15	780.20/1.91
6	1 814.75/1.92	16	1 410.22/1.93
7	2 152.00/1.94	17	2 229.87/1.91
8	2 115.68/1.94	18	1 752.24/1.94
9	884.66/1.92	19	295.62/1.90
10	1 000.62/1.93	20	385.93/1.94

表2. 最优方法提取鹿茸样品DNA的含量及质量评价

参考文献 26

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鹿茸基因组DNA提取方法的比较研究

Genomic DNA of Pilose Antler: Comparison of Extraction Methods

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