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中国农学通报 ›› 2012, Vol. 28 ›› Issue (30): 1-5.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.2012-2714

所属专题： 生物技术； 水稻

• 农学 农业基础科学 •    下一篇

水稻草状矮缩病毒P2基因多克隆抗体的制备及应用

杨靓 邓萍 王开放 刘妍 刘小娟 吴祖建   

  • 收稿日期:2012-08-03 修回日期:2012-08-20 出版日期:2012-10-25 发布日期:2012-10-25
  • 基金资助:

    福建省教育厅科技项目;福建省自然科学基金项目;国家自然科学基金项目

Prokaryotic Expression of P2 protein of Rice Grassy Stunt Virus, and Preparation and Application of Its Polyclonal Antibody

  • Received:2012-08-03 Revised:2012-08-20 Online:2012-10-25 Published:2012-10-25

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摘要：

为了进行水稻草状矮缩病毒(Rice grassy stunt virus, RGSV)诊断方法和蛋白功能研究。通过RT-PCR方法从感染RGSV的水稻中克隆该病毒的P2基因，并将此基因片段重组到原核表达载体pDEST17上。将重组载体转化E. coli Rosetta，经IPTG诱导后获得分子量约为29 kDa含HIS标签的融合蛋白。以诱导的融合蛋白为抗原，免疫新西兰大耳白兔获得多克隆抗体，经酶联免疫检测发现其效价达到l:8192。并用制备的抗体建立了特异、灵敏的检测RGSV的IC-RT-PCR和Dot-blot ELISA方法，为该病毒的检测、诊断提供了保障，同时也为P2蛋白的结构和功能研究奠定了基础。

关键词: 安徽省, 安徽省

Abstract:

P2 gene of Rice grassy stunt virus was amplified from the infected rice leaves by RT-PCR, and it was cloned into prokaryote expression vector pDEST17. The 29 kDa HIS6-tag fusion protein was obtained with induction of IPTG from E.coli Rosetta cells, which was used to immunize the healthy rabbits as an antigen. The antiserum of P2 was prepared after injections and used to establish the Immunocapture RT- PCR and Dot-blot ELISA method to detect the RGSV

中图分类号: