罗氏沼虾维氏气单胞菌的分离鉴定

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb20200100027

中国农学通报 ›› 2020, Vol. 36 ›› Issue (36): 137-143.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb20200100027

所属专题：水产渔业

罗氏沼虾维氏气单胞菌的分离鉴定

郭莹¹(), 郭青松², 周淼¹, 李艳和¹, 王卫民¹()

¹华中农业大学水产学院,农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室,武汉 430070
²武汉市江夏区农业综合执法大队,武汉 430070

收稿日期:2020-01-08 修回日期:2020-02-13 出版日期:2020-12-25 发布日期:2020-12-23
通讯作者: 王卫民
作者简介:郭莹,女,1992年出生,河南安阳人,硕士研究生,研究方向：罗氏沼虾病原检测与鉴定方法的建立。通信地址：430070 湖北省武汉市洪山区狮子山街一号华中农业大学水产学院,Tel：13260637385,E-mail： 852206275@qq.com。
基金资助:
国家自然科学基金青年基金项目“基于GBS技术的克氏原螯虾系统地理学研究”(31501858)

Aeromonas veronii from Macrobrachium rosenbergii: Isolation and Identification

Guo Ying¹(), Guo Qingsong², Zhou Miao¹, Li Yanhe¹, Wang Weimin¹()

¹Key Lab of Agricultural Animal Genetics, Breeding and Reproduction of Ministry of Education, College of Fisheries, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070
²Agricultural Comprehensive Law Enforcement Brigade of Jiangxia District, Wuhan 430070

Received:2020-01-08 Revised:2020-02-13 Online:2020-12-25 Published:2020-12-23
Contact: Wang Weimin

摘要/Abstract

摘要：

为了判断罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)幼虾发病死亡的原因,本研究从濒死的罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)中,分离了一株具有生长优势的菌株,对分离菌株形态学、革兰氏染色、生理生化进行鉴定。结果表明,该分离菌株为革兰氏阴性,氧化酶、赖氨酸脱羧酶、枸缘酸盐、吲哚、甘露醇、蔗糖、麦芽糖、V-P、纤维二糖为阳性,并对该分离细菌16S rRNA基因进行序列以及系统发育树分析,该分离菌株与维氏气单胞菌聚为一支,其亲缘关系较近,对该分离菌株理化性质和16S rRNA序列综合分析,可判断该分离菌株为维氏气单胞菌（Aeromonas veronii,登录号MN733186）。以浸泡法进行人工感染实验,证明了该分离菌株对罗氏沼虾幼虾具有较强致病性,对分离细菌的药物敏感性进行检测,结果显示,该菌株对头孢曲松、氯霉素、氟苯尼考、多西环素和利福平5种药物高度敏感,对新生霉素和复方新诺明2种药物中度敏感,对环丙沙星、诺氟沙星、红霉素、阿奇霉素、链霉素、卡那霉素、四环素7种药物耐药。本研究实验结果为罗氏沼虾维氏气单胞菌的病原鉴定及药物诊治提供一定的参考和理论基础。

关键词: 罗氏沼虾, 维氏气单胞菌, 分离鉴定, 革兰氏染色, 生化鉴定, 药敏试验

Abstract:

To identify the mortality cause of Macrobrachium rosenbergii, the strain with growth advantage was isolated from the dying M. rosenbergii, and its morphological characteristics, gram staining, physiology and biochemistry experiments were studied. The results showed that the isolated strain was a gram-negative, while oxidase, lysine decarboxylase, citrate, indole, d-mannose, sucrose, maltose, v-p, and cellobiose dihydrolase were positive. The 16S rRNA gene of this isolate was sequenced and phylogenetic tree was constructed. The isolated strain was clustered with Aeromonas veronii and had a close genetic relationship. The isolated strain was confirmed as Aeromonas veronii (Accession number MN733186) based on the biochemical characters and 16S rRNA sequence analysis. The artificial infection experiment with the immersion method confirmed that the isolated strain was highly pathogenetic to M. rosenbergii. The results of drug susceptibility tests revealed that the strain was highly sensitive to ceftriaxone, chloramphenicol, florfenicol, doxycycline, and rifampicin; it was moderately sensitivity to novobiocin and compound sulfamethoxazole and resistant to ciprofloxacin, norfloxacin, erythromycin, azithromycin, streptomycin, kanamycin, tetracycline. The current study could provide a reference and theoretical basis for the pathogen identification, drug diagnosis and treatment of Aeromonas cavia in M. rosenbergii.

Key words: Macrobrachium rosenbergii, Aeromonas veronii, isolation and identification, gram staining, biochemical identification, drug sensitivity test

中图分类号:

S945.4+1

郭莹, 郭青松, 周淼, 李艳和, 王卫民. 罗氏沼虾维氏气单胞菌的分离鉴定[J]. 中国农学通报, 2020, 36(36): 137-143.

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图/表 7

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生化项目	分离菌株	模式菌株(ATCC35624)	生化项目	分离菌株	模式菌株(ATCC35624)
氧化酶	+	+	山梨醇	_	_
硫化氢	_	_	甘露醇	+	+
阿拉伯糖	_	_	水杨苷	_	_
丙二酸盐	_	_	蔗糖	+	+
尿素酶	_	_	乳糖	_	_
赖氨酸脱羧酶	+	_	麦芽糖	+	+
鸟氨酸脱羧酶	_	_	V-P	+	+
枸缘酸盐	+	+	纤维二糖	+	+
吲哚	+	+	肌醇	_	_

生化项目	分离菌株	模式菌株(ATCC35624)	生化项目	分离菌株	模式菌株(ATCC35624)
氧化酶	+	+	山梨醇	_	_
硫化氢	_	_	甘露醇	+	+
阿拉伯糖	_	_	水杨苷	_	_
丙二酸盐	_	_	蔗糖	+	+
尿素酶	_	_	乳糖	_	_
赖氨酸脱羧酶	+	_	麦芽糖	+	+
鸟氨酸脱羧酶	_	_	V-P	+	+
枸缘酸盐	+	+	纤维二糖	+	+
吲哚	+	+	肌醇	_	_

药物	抑菌圈直径判断标准/mm			药物含量/ (μg/disc)	抑菌圈直径/mm	敏感性
药物	耐药	中度敏感	高度敏感	药物含量/ (μg/disc)	抑菌圈直径/mm	敏感性
环丙沙星	≤15	16~20	≥21	5.00	12.42	R
诺氟沙星	≤12	13~16	≥17	10.00	7.73	R
红霉素	≤13	14~22	≥23	15.00	0.00	R
阿奇霉素	≤13	14~17	≥18	15.00	0.00	R
头孢曲松	≤14	15~20	≥21	30.00	44.40	S
新生霉素	≤12	13~16	≥17	30.00	14.05	I
链霉素	≤11	12~14	≥15	10.00	0.00	R
卡那霉素	≤13	14~17	≥18	30.00	10.32	R
氯霉素	≤12	13~17	≥18	30.00	31.36	S
氟苯尼考	≤17	18~20	≥21	30.00	33.75	S
四环素	≤14	15~18	≥19	30.00	8.30	R
多西环素	≤12	13~15	≥16	30.00	18.16	S
复方新诺明	≤14	15~20	≥21	23.75	15.25	I
利福平	≤16	17~20	≥20	5.00	20.57	S

药物	抑菌圈直径判断标准/mm			药物含量/ (μg/disc)	抑菌圈直径/mm	敏感性
药物	耐药	中度敏感	高度敏感	药物含量/ (μg/disc)	抑菌圈直径/mm	敏感性
环丙沙星	≤15	16~20	≥21	5.00	12.42	R
诺氟沙星	≤12	13~16	≥17	10.00	7.73	R
红霉素	≤13	14~22	≥23	15.00	0.00	R
阿奇霉素	≤13	14~17	≥18	15.00	0.00	R
头孢曲松	≤14	15~20	≥21	30.00	44.40	S
新生霉素	≤12	13~16	≥17	30.00	14.05	I
链霉素	≤11	12~14	≥15	10.00	0.00	R
卡那霉素	≤13	14~17	≥18	30.00	10.32	R
氯霉素	≤12	13~17	≥18	30.00	31.36	S
氟苯尼考	≤17	18~20	≥21	30.00	33.75	S
四环素	≤14	15~18	≥19	30.00	8.30	R
多西环素	≤12	13~15	≥16	30.00	18.16	S
复方新诺明	≤14	15~20	≥21	23.75	15.25	I
利福平	≤16	17~20	≥20	5.00	20.57	S

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