草鱼肝胆综合症并发细菌疾病病原分离鉴定及药敏试验

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb18120095

中国农学通报 ›› 2020, Vol. 36 ›› Issue (5): 138-143.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb18120095

所属专题：水产渔业

草鱼肝胆综合症并发细菌疾病病原分离鉴定及药敏试验

饶毅, 付辉云, 陈文静, 黄江峰, 周智勇, 金友萍, 徐先栋()

江西省水产科学研究所,南昌 330039

收稿日期:2018-12-19 修回日期:2019-02-10 出版日期:2020-02-15 发布日期:2020-02-21
通讯作者: 徐先栋
作者简介:饶毅,男,1983年出生,江西上饶人,高级水产师,学士,研究方向：鱼类健康养殖及病害防治研究。通信地址：330039 江西省南昌市1099号江西省水产科学研究所,Tel：0791-88133197,E-mail：851529616@qq.com。
基金资助:
江西省现代农业科研协同创新专项“池塘病害防控技术研究与绿色渔药开发与使用”(JXXTCX201602-05);江西省现代农业科研协同创新专项“草鱼池塘健康生态高效养殖技术研究”(JXXTCX2015004-006);江西省现代农业产业技术体系专项饲料岗(JXARS-03)

A Pathogen from Grass Carp with Hepatobiliary Syndrome Complicated with Bacterial Disease: Isolation, Identification and Drug Susceptibility Test

Rao Yi, Fu Huiyun, Chen Wenjing, Huang Jiangfeng, Zhou Zhiyong, Jin Youping, Xu Xiandong()

Jiangxi Fisheries Research Institute, Nanchang 330039

Received:2018-12-19 Revised:2019-02-10 Online:2020-02-15 Published:2020-02-21
Contact: Xu Xiandong

摘要/Abstract

摘要：

对2016年6月江西省鄱阳县高家岭一个养殖场养殖草鱼发生的暴发性疾病进行病原分离鉴定及药敏试验,旨在确定其病因,为今后生产中有效防控该疾病提供参考。利用细菌分离方法在无菌条件下从患肝胆综合症草鱼体内分离、纯化致病菌,通过形态学、生化鉴定和16SrDNA序列分析、gyrB基因序列分析进行菌株鉴定,用攻毒试验找出草鱼的半致死浓度,并采用滤纸片扩散法进行药敏试验。从患肝胆综合症草鱼体内分离、纯化到一株致病菌,经鉴定为维氏气单胞菌,命名为PYG1。攻毒试验表明该菌能感染草鱼,且半致死浓度为1.5×10 ⁴ CFU/g鱼体质量。药敏试验结果表明该菌只对氨基糖苷类、第二代和第三代头孢类以及喹诺酮类的氧氟沙星共9种药物表现出敏感或中度敏感,对所测的其他药物耐药,为强耐药菌株。维氏气单胞菌PYG1是引起此次草鱼发病的致病菌,可选用氨基糖苷类、头孢类及喹诺酮类的氧氟沙星等药物进行防治。

关键词: 草鱼, 肝胆综合症, 维氏气单胞菌, 分离鉴定, 药敏试验

Abstract:

The pathogen identification and drug susceptibility test were performed on grass carp (Ctenopharyngodon idellus) that suffered from an acute disease in a fish farm in Gaojialing town, Poyang County, Jiangxi Province in June 2016. The aim was to determine and identify the cause of death and provide reference for effective prevention and control of the disease in future. The pathogenic bacteria were isolated and purified from grass carp with hepatobiliary syndrome by bacterial isolation method under aseptic condition. The morphological, biochemical analysis, 16S rDNA sequence analysis and gyrB sequence analysis were used to identify the strains, and the challenge test was conducted to obtain LD₅₀of grass carp. The drug susceptibility test was conducted by a filter paper diffusion method. The results showed that a pathogenic bacteria strain was isolated from grass carp. The pathogen was identified as Aeromonas veronii, called PYG1. PYG1 could infect grass fish, and the LD₅₀ was 1.5×10 ⁴CFU/g. The drug susceptibility test showed that the strain was susceptible or moderately susceptible to 9 kinds of drugs, including aminoglycosides, second-generation and third-generation cephalosporins and ofloxacin, and was resistant to other drugs tested, and was a strongly resistant strain. In conclusion, the pathogen of grass carp is A. veronii PYG1, which could be controlled with aminoglycosides, cephalosporins and quinolones.

Key words: grass carp, hepatobiliary syndrome, Aeromonas veronii, isolation and identification, drug susceptibility test

中图分类号:

S948

饶毅, 付辉云, 陈文静, 黄江峰, 周智勇, 金友萍, 徐先栋. 草鱼肝胆综合症并发细菌疾病病原分离鉴定及药敏试验[J]. 中国农学通报, 2020, 36(5): 138-143.

Rao Yi, Fu Huiyun, Chen Wenjing, Huang Jiangfeng, Zhou Zhiyong, Jin Youping, Xu Xiandong. A Pathogen from Grass Carp with Hepatobiliary Syndrome Complicated with Bacterial Disease: Isolation, Identification and Drug Susceptibility Test[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2020, 36(5): 138-143.

图/表 5

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菌液浓度/(CFU/mL)	感染剂量/mL	感染浓度/(CFU/tail)	感染数量/尾	死亡数量/尾	死亡率/%
1.5×10⁸	0.2	3×10⁷	10×2	20	100
1.5×10⁷	0.2	3×10⁶	10×2	14	70
1.5×10⁶	0.2	3×10⁵	10×2	10	50
1.5×10⁵	0.2	3×10⁴	10×2	6	30
1.5×10⁴	0.2	3×10³	10×2	0	0
对照control	0.2	0	10×2	0	0

菌液浓度/(CFU/mL)	感染剂量/mL	感染浓度/(CFU/tail)	感染数量/尾	死亡数量/尾	死亡率/%
1.5×10⁸	0.2	3×10⁷	10×2	20	100
1.5×10⁷	0.2	3×10⁶	10×2	14	70
1.5×10⁶	0.2	3×10⁵	10×2	10	50
1.5×10⁵	0.2	3×10⁴	10×2	6	30
1.5×10⁴	0.2	3×10³	10×2	0	0
对照control	0.2	0	10×2	0	0

项目	菌株PYG1	维氏气单胞菌	项目	菌株PYG1	维氏气单胞菌
革兰氏染色	-	-	产氨Ammonia production	+	+
接触酶	-	-	水解脲素Hydrolyzed urea	-	-
氧化酶	+	+	亚硝酸盐Nitrite	-	-
吲哚	+	+	反硝化Denitrification	-	-
甲基红	-	-	硝酸盐还原Nitrate reduction	+	+
七叶苷水解	+	+	蔗糖Sucrose	+	+
硫化氢	-	-	葡萄糖发酵Glucose ferment	+	+
VP test	+	+	明胶液化Gelaune liquefaction	+	+
水杨苷发酵	+	+	甘露醇Mannitol	+	+

项目	菌株PYG1	维氏气单胞菌	项目	菌株PYG1	维氏气单胞菌
革兰氏染色	-	-	产氨Ammonia production	+	+
接触酶	-	-	水解脲素Hydrolyzed urea	-	-
氧化酶	+	+	亚硝酸盐Nitrite	-	-
吲哚	+	+	反硝化Denitrification	-	-
甲基红	-	-	硝酸盐还原Nitrate reduction	+	+
七叶苷水解	+	+	蔗糖Sucrose	+	+
硫化氢	-	-	葡萄糖发酵Glucose ferment	+	+
VP test	+	+	明胶液化Gelaune liquefaction	+	+
水杨苷发酵	+	+	甘露醇Mannitol	+	+

药物类别	药物名称	抑菌圈直径/mm	敏感性	药物类别	药物名称	抑菌圈直径/mm	敏感性
青霉素类	青霉素	0	R	头孢类	头孢氨苄¹	0	R
	氨苄青霉素	0	R		头孢拉定¹	11	R
	羧苄西林	0	R		头孢呋肟²	19	I
	苯唑西林	0	R		头孢哌酮³	12	R
	哌拉西林	0	R		头孢曲松³	35	S
酰胺醇类	氯霉素	11	R		头孢唑啉¹	13	R
酰胺醇类	氟苯尼考	0	R	头孢他啶³		22	S
氨基糖苷类	丁胺卡那霉素	20	S	大环内酯类	红霉素	11	R
	卡那霉素	15	I	大环内酯类	麦迪霉素	11	R
	庆大霉素	16	S	多肽类	万古霉素	0	R
	新霉素	16	I	多肽类	多粘菌素	0	R
四环素类	四环素	0	R	喹诺酮类	环丙沙星	10	R
	强力霉素	9	R		氧氟沙星	15	I
	美满霉素	15	I		诺氟沙星	0	R
硝基呋喃类	呋喃唑酮	13	R		恩诺沙星	12	R
磺胺类	复方新诺明	0	R		左氧氟沙	13	R
林可酰胺	克林霉素	0	R

草鱼肝胆综合症并发细菌疾病病原分离鉴定及药敏试验

A Pathogen from Grass Carp with Hepatobiliary Syndrome Complicated with Bacterial Disease: Isolation, Identification and Drug Susceptibility Test

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