道地中药材川贝母特异性PCR鉴别方法研究

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb2021-0727

中国农学通报 ›› 2022, Vol. 38 ›› Issue (19): 59-65.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb2021-0727

所属专题：生物技术；园艺

道地中药材川贝母特异性PCR鉴别方法研究

张富丽¹(), 张义蓉¹, 兰青阔², 杨晓凤¹, 刘炜¹, 付绍兵³, 刘茜¹, 陈敏¹, 尹全¹()

¹四川省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,成都 610066
²天津市农业科学院种质资源与生物技术研究所,天津 300381
³青海绿康生物开发有限公司,青海海东 810500

收稿日期:2021-07-29 修回日期:2022-02-10 出版日期:2022-07-05 发布日期:2022-07-13
通讯作者: 尹全
作者简介:张富丽,女,1978年出生,四川大竹人,副研究员,博士,研究方向：农产品质量安全控制与评价技术。通信地址：610066 四川省成都市锦江区静居寺路20号附102号,Tel：028-84504139,E-mail： zhang_fannie@163.com。
基金资助:
四川省创新能力提升工程公益深化项目“几种名贵中药材真实性鉴定分子检测技术的建立”(2016GYSH-032);成都市科技局重点研发计划“川贝母真伪及掺假量化判定技术研究”(2019-YF05-02257-SN)

A Specific PCR Method for Identifying the Authentic Medicinal Material Bulbus Fritillariae cirrhosae

ZHANG Fuli¹(), ZHANG Yirong¹, LAN Qingkuo², YANG Xiaofeng¹, LIU Wei¹, FU Shaobing³, LIU Qian¹, CHEN Min¹, YIN Quan¹()

¹Institute of Quality Standard and Testing Technology Research, Sichuan Academy of Agricultural Sciences, Chengdu 610066
²Institute of Germplasm Resources and Biotechnology, Tianjin Academy of Agricultural Sciences, Tianjin 300381
³Qinghai Lvkang Biological Development Co., Ltd., Haidong, Qinghai 810500

Received:2021-07-29 Revised:2022-02-10 Online:2022-07-05 Published:2022-07-13
Contact: YIN Quan

摘要/Abstract

摘要：

为建立快速检测中药材川贝母成分的特异性PCR法,从NCBI数据库下载植物HMGR基因序列,根据同源性区域设计兼并引物,对川贝母及其易混品鳞茎基因组进行扩增。通过比对川贝母特异性DNA片段区域,设计引物扩增获得川贝母基原物种特异核酸片段。从川贝母基原鳞茎中提取DNA,设计特异引物对BMH-TF/BMH-TR,优化PCR扩增条件,通过特异性、灵敏度实验验证,建立特异性PCR检测体系。采用该方法从川贝母基原中扩增出一条120 bp左右条带,而非川贝母样品、空白对照在相同条件下无扩增条带,检测灵敏度为2 ng/μL,检测下限为4 ng。对10个市售药材的检测结果证明,该方法简便可行、重现性好。该PCR法可快速、准确鉴别川贝母基原,具有操作简便、快速、特异性高的优点。

关键词: 川贝母, 多基源, 特异性, 聚合酶链式反应, 分子鉴定

Abstract:

To establish a specific PCR method for rapid detection of plant origin components of bulbus Fritillariae cirrhosae, the HMGR gene sequence was downloaded from the NCBI database and compared. Degenerate primers were designed according to the homologous DNA fragments, and the genome from bulbus F. cirrhosae and other easily confused species were analyzed. Then specific primers were designed for longer specific nucleic acid fragment from bulbus F. cirrhosae. The total DNA was extracted from dry bulbs of bulbus F. cirrhosae. The specific primers BMH-TF/BMH-TR were designed and the PCR amplification conditions were optimized. Then the specificity and sensitivity were tested, and the PCR detection system specific for bulbus F. cirrhosae was successfully established. The PCR products were able to amplify a single band of 120 bp by agarose gel electrophoresis, and no amplification band was found in other samples and the blank under the same conditions. The sensitivity of this primer was 2 ng/μL, the lower limit of detection was 4 ng. The test results of 10 kinds of commercially available medicinal herbs proved that this method was simple, accurate and reliable with good reproducibility. This PCR method can identify bulbus F. cirrhosae rapidly, and has the advantages of rapidness and high specificity.

Key words: bulbus Fritillariae cirrhosae, multi-species origin, specificity, PCR, molecular identification

中图分类号:

R282.5

张富丽, 张义蓉, 兰青阔, 杨晓凤, 刘炜, 付绍兵, 刘茜, 陈敏, 尹全. 道地中药材川贝母特异性PCR鉴别方法研究[J]. 中国农学通报, 2022, 38(19): 59-65.

ZHANG Fuli, ZHANG Yirong, LAN Qingkuo, YANG Xiaofeng, LIU Wei, FU Shaobing, LIU Qian, CHEN Min, YIN Quan. A Specific PCR Method for Identifying the Authentic Medicinal Material Bulbus Fritillariae cirrhosae[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2022, 38(19): 59-65.

图/表 4

参考文献 24

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序号	编号	名称	性状	品牌	产地（标识产地）	来源渠道
1	P121000	川贝母对照品	粉末	—	—	中国食品药品检定研究院
2	1-JY-KD	卷叶贝母	原药材	—	四川康定	青海绿康生物开发有限公司
3	2-AZ-SP	暗紫贝母	原药材	—	四川松潘	青海绿康生物开发有限公司
4	3-SS-KD	梭砂贝母	原药材	—	青海互助	青海绿康生物开发有限公司
5	4-WB-SP	瓦布贝母	原药材	—	四川茂县	青海绿康生物开发有限公司
6	5-GS-ZX	甘肃贝母	原药材	—	甘肃漳县	青海绿康生物开发有限公司
7	6-TB-WX	太白贝母	原药材	—	重庆巫溪	青海绿康生物开发有限公司
8	7-ZBM1	浙贝母	原药材	—	浙江	青海绿康生物开发有限公司
9	8-HBBM	湖北贝母	原药材	—	湖北	青海绿康生物开发有限公司
10	9-PBM1	平贝母	原药材	—	黑龙江	青海绿康生物开发有限公司
11	10-YLBM	伊贝母	原药材	—	新疆	青海绿康生物开发有限公司
12	11-GCG	光慈姑	原药材	华御堂	云南	华御堂中药材淘宝店(https://717574255.taobao.com/shop/view_shop.htm)
13	12-TBM1	土贝母	原药材	药王堂	河北	药王堂淘宝店(https://yaowangtang.taobao.com/)
14	13-T	川贝粉	粉末	雷允上	四川	阿里健康大药房(https://www.liangxinyao.com/?scene=taobao_shop)
15	14-T	川贝母	原药材	同芙	四川	同芙旗舰店(https://tongfu.tmall.com/shop/view_shop.htm)
16	15-T	平贝母	原药材	同芙	四川	同芙旗舰店(https://tongfu.tmall.com/shop/view_shop.htm)
17	16-T	贝母粉	粉末	—	—	成都国际贸易城中药材市场
18	17-T	川贝母	原药材	—	青海	成都国际贸易城中药材市场
19	18-T	浙贝母	原药材	—	浙江	成都国际贸易城中药材市场
20	19-T	川贝母	原药材	—	四川	成都德仁堂大药房
21	20-T	贝母	原药材	藏禧堂	四川	藏禧堂传统滋补专营店 https://mall.jd.com/index-690248.html
22	21-T	贝母	原药材	栢晟	四川	栢晟营养保健专营店(https://mall.jd.com/index-197242.html)
23	22-T	川贝母粉	粉末	善一坊	四川	善一坊官方旗舰店(https://mall.jd.com/index-89927.html)

序号	编号	名称	性状	品牌	产地（标识产地）	来源渠道
1	P121000	川贝母对照品	粉末	—	—	中国食品药品检定研究院
2	1-JY-KD	卷叶贝母	原药材	—	四川康定	青海绿康生物开发有限公司
3	2-AZ-SP	暗紫贝母	原药材	—	四川松潘	青海绿康生物开发有限公司
4	3-SS-KD	梭砂贝母	原药材	—	青海互助	青海绿康生物开发有限公司
5	4-WB-SP	瓦布贝母	原药材	—	四川茂县	青海绿康生物开发有限公司
6	5-GS-ZX	甘肃贝母	原药材	—	甘肃漳县	青海绿康生物开发有限公司
7	6-TB-WX	太白贝母	原药材	—	重庆巫溪	青海绿康生物开发有限公司
8	7-ZBM1	浙贝母	原药材	—	浙江	青海绿康生物开发有限公司
9	8-HBBM	湖北贝母	原药材	—	湖北	青海绿康生物开发有限公司
10	9-PBM1	平贝母	原药材	—	黑龙江	青海绿康生物开发有限公司
11	10-YLBM	伊贝母	原药材	—	新疆	青海绿康生物开发有限公司
12	11-GCG	光慈姑	原药材	华御堂	云南	华御堂中药材淘宝店(https://717574255.taobao.com/shop/view_shop.htm)
13	12-TBM1	土贝母	原药材	药王堂	河北	药王堂淘宝店(https://yaowangtang.taobao.com/)
14	13-T	川贝粉	粉末	雷允上	四川	阿里健康大药房(https://www.liangxinyao.com/?scene=taobao_shop)
15	14-T	川贝母	原药材	同芙	四川	同芙旗舰店(https://tongfu.tmall.com/shop/view_shop.htm)
16	15-T	平贝母	原药材	同芙	四川	同芙旗舰店(https://tongfu.tmall.com/shop/view_shop.htm)
17	16-T	贝母粉	粉末	—	—	成都国际贸易城中药材市场
18	17-T	川贝母	原药材	—	青海	成都国际贸易城中药材市场
19	18-T	浙贝母	原药材	—	浙江	成都国际贸易城中药材市场
20	19-T	川贝母	原药材	—	四川	成都德仁堂大药房
21	20-T	贝母	原药材	藏禧堂	四川	藏禧堂传统滋补专营店 https://mall.jd.com/index-690248.html
22	21-T	贝母	原药材	栢晟	四川	栢晟营养保健专营店(https://mall.jd.com/index-197242.html)
23	22-T	川贝母粉	粉末	善一坊	四川	善一坊官方旗舰店(https://mall.jd.com/index-89927.html)

编号	商品名	性状	来源	检测方法		判定结果
编号	商品名	性状	来源	PCR	RFLP-PCR	判定结果
13-T	川贝粉	粉末	阿里健康大药房淘宝店	+	+	川贝母
14-T	川贝母	原药材	同芙天猫旗舰店	+	+	川贝母
17-T	川贝母	原药材	成都国际贸易城中药材市场	+	+	川贝母
19-T	川贝母	原药材	成都德仁堂大药房	+	+	川贝母
22-T	川贝母粉	粉末	善一坊京东旗舰店	-	-	非川贝母
16-T	贝母粉	粉末	成都国际贸易城中药材市场	-	-	非川贝母
20-T	贝母	原药材	藏禧堂京东专营店	-	-	非川贝母
21-T	贝母	原药材	栢晟京东专营店	+	+	川贝母
15-T	平贝母	原药材	同芙天猫旗舰店	-	-	非川贝母
18-T	浙贝母	原药材	成都国际贸易城中药材市场	-	-	非川贝母

编号	商品名	性状	来源	检测方法		判定结果
编号	商品名	性状	来源	PCR	RFLP-PCR	判定结果
13-T	川贝粉	粉末	阿里健康大药房淘宝店	+	+	川贝母
14-T	川贝母	原药材	同芙天猫旗舰店	+	+	川贝母
17-T	川贝母	原药材	成都国际贸易城中药材市场	+	+	川贝母
19-T	川贝母	原药材	成都德仁堂大药房	+	+	川贝母
22-T	川贝母粉	粉末	善一坊京东旗舰店	-	-	非川贝母
16-T	贝母粉	粉末	成都国际贸易城中药材市场	-	-	非川贝母
20-T	贝母	原药材	藏禧堂京东专营店	-	-	非川贝母
21-T	贝母	原药材	栢晟京东专营店	+	+	川贝母
15-T	平贝母	原药材	同芙天猫旗舰店	-	-	非川贝母
18-T	浙贝母	原药材	成都国际贸易城中药材市场	-	-	非川贝母

道地中药材川贝母特异性PCR鉴别方法研究

A Specific PCR Method for Identifying the Authentic Medicinal Material Bulbus Fritillariae cirrhosae

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