农杆菌介导贵州平塘黑糯茎尖转化获得转McCHIT1基因水稻研究

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb16010036

中国农学通报 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (27): 114-120.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb16010036

所属专题：生物技术；水稻

农杆菌介导贵州平塘黑糯茎尖转化获得转McCHIT1基因水稻研究

张笑寒,仇志浪,赵德刚

贵州省贵阳市花溪区贵州大学南校区农业生物工程研究院,贵州大学生命科学学院,贵州省贵阳市花溪区贵州大学南校区农业生物工程研究院

收稿日期:2016-01-10 修回日期:2016-03-02 接受日期:2016-03-25 出版日期:2016-09-29 发布日期:2016-09-29
通讯作者: 赵德刚
基金资助:
国家转基因新品种培育重大专项-安全转基因技术研究(2013ZX08010-003)、贵州省重大科技专项贵州特有水稻种质资源优异基因克隆及育种技术研究应用(黔科合重大专项字[2012]6005号)

Genetic Transformation of McCHIT1 Gene into Rice Shoot Tips via Agrobacterium-mediated Method via Agrobacterium-mediated Method

Received:2016-01-10 Revised:2016-03-02 Accepted:2016-03-25 Online:2016-09-29 Published:2016-09-29

摘要/Abstract

摘要： 为了提高农杆菌介导的水稻茎尖遗传转化效率，笔者以贵州特有的地方水稻品种‘平塘黑糯’茎尖为材料，以含有Ubiqutin 启动子驱动苦瓜几丁质酶基因McCHIT1 表达的植物表达载体pCambia-Ubi-McCHIT1 为转化载体，采用正交试验设计，系统研究了菌液OD600值、真空处理时间和真空渗透压强对水稻茎尖遗传转化效率的影响。结果表明：在3 个因素中，真空处理时间是影响水稻转化效率和死亡率的最关键因素。农杆菌介导‘平塘黑糯’茎尖遗传转化的最优条件为农杆菌菌液浓度OD600为1.0、真空处理时间为7 min、真空渗透压强为15 kPa。GUS组织化学染色和PCR分子鉴定表明，通过本研究优化的农杆菌介导水稻茎尖遗传转化体系，已将苦瓜的几丁质酶基因McCHIT1 已整合到水稻基因组中，获得转McCHIT1基因‘平塘黑糯’新种质。

关键词: El Nino事件, El Nino事件, La Nina事件, 安徽省, 气温, 降水, 旱涝灾害

Abstract: To improve the efficiency of genetic transformation of rice shoot tips via Agrobacterium-mediated method, a glutinous rice variety“Pingtang Heinuo”was used as the research material, the vector pCambia-Ubi-McCHIT1 with Ubi promotor driving bitter melon chitinase gene McCHIT1 was used as the transformation vector, we investigated systematically the influence of Agrobacterium concentration, vacuum treatment time and vacuum osmotic pressure on the efficiency of Agrobacterium-mediated genetic transformation of rice shoot tips by orthogonal experimental design method. The results showed that, among the three factors, the vacuum treatment time was the key factor which influenced the transformation efficiency and death rate. The optimum Agrobacterium concentration was OD600=1.0, the optimum vacuum treatment time was 7 min and the optimum vacuum osmotic pressure was 15 kPa. The histochemical staining of GUS activity and the identifying of PCR amplification confirmed that McCHIT1 gene was integrated into the rice genome. It demonstrated that we had created a novel transgenic rice germplasm with McCHIT1, and developed a high efficiency genetic transformation system for rice shoot tips by Agrobacterium-mediated method.

中图分类号:

Q785

张笑寒,仇志浪,赵德刚. 农杆菌介导贵州平塘黑糯茎尖转化获得转McCHIT1基因水稻研究[J]. 中国农学通报, 2016, 32(27): 114-120.

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Genetic Transformation of McCHIT1 Gene into Rice Shoot Tips via Agrobacterium-mediated Method via Agrobacterium-mediated Method

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