云南蓝莓根癌病病原鉴定及其防控药剂的筛选

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb2020-0315

中国农学通报 ›› 2021, Vol. 37 ›› Issue (16): 119-126.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb2020-0315

所属专题：植物保护

云南蓝莓根癌病病原鉴定及其防控药剂的筛选

张荣琴¹^,²(), 万效琰¹, 张晋豪¹, 代真林¹, 郑建立³, 崔兴国³, 赵项武³, 魏兰芳¹(), 姬广海¹()

¹云南农业大学/农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室,昆明 650201
²云南省红河热带农业科学研究所,云南河口 661300
³曲靖佳沃现代农业有限公司,云南曲靖 655000

收稿日期:2020-08-03 修回日期:2021-03-21 出版日期:2021-06-05 发布日期:2021-06-16
通讯作者: 魏兰芳,姬广海
作者简介:张荣琴,女,1994年出生,云南楚雄人,硕士,主要从事植物病害防治研究。通信地址：661300 云南省红河州河口县沙坝云南省红河热带农业科学研究所,E-mail： 382429016@qq.com。
基金资助:
国家重点研发计划项目“主要经济作物重要及新成灾害绿色综合防控技术”(2019YFD1002000);云南省“万人计划”产业技术领军人才专项(YNWR-CYJS-2019-046);云南省重点研发(农业领域)计划项目“蓝莓病虫害诊断和绿色防控综合体系建设”(2018BB016)

Pathogen Identification of Blueberry Crown Gall Disease in Yunnan Province and Screening of Control Agents in Field

Zhang Rongqin¹^,²(), Wan Xiaoyan¹, Zhang Jinhao¹, Dai Zhenlin¹, Zheng Jianli³, Cui Xingguo³, Zhao Xiangwu³, Wei Lanfang¹(), Ji Guanghai¹()

¹Key Laboratory of Agriculture Biodiversity for Plant Disease Management of the Ministry of Education/ Yunnan Agricultural University, Kunming 650201
²Honghe Tropical Agricultural Science Institute of Yunnan, Hekou Yunnan 661300
³Qujing Jiawo Modern Agriculture Co., Ltd., Qujing Yunnan 655000

Received:2020-08-03 Revised:2021-03-21 Online:2021-06-05 Published:2021-06-16
Contact: Wei Lanfang,Ji Guanghai

摘要/Abstract

摘要：

研究旨在确定云南省蓝莓主产区发生的蓝莓根癌病病原菌种类,并进行田间防治药剂筛选。采集云南省蓝莓主产区蓝莓根癌病样品,通过发病症状、菌落形态观察、致病性测定、Biolog分析、16S rDNA 序列分析比较进行系统鉴定。在发病严重的蓝莓基地采用噻霉酮、申嗪霉素等8种药剂进行田间防治试验。从蓝莓根癌病样品中分离、纯化获得的菌株L-11接种向日葵、番茄、蓝莓植株均能发病,且发病症状与田间症状相同,重新分离得到形态相同的菌株。16S rDNA序列分析和系统进化树结果表明,L-11菌株序列与根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株Ell-7（登录号FJ613554.1）同源性高达97.65%,与根癌土壤杆菌处于同一分支上。菌株L-11利用ipt基因的特异性引物AtP3F/AtP3R能扩增出155 bp的特异性片段,进一步证实蓝莓根癌病由根癌土壤杆菌引起。田间药效试验结果表明,1.5%噻霉酮水乳剂对蓝莓根癌病有较好的防治效果,相对防效为52%。这是云南首次报道由根癌土壤杆菌引起蓝莓根癌病。

关键词: 蓝莓根癌病, 病原菌, 分离, 鉴定, 根癌土壤杆菌, 药剂筛选

Abstract:

The study aims to determine the species of blueberry crown gall pathogenic bacteria currently occurring in the main blueberry producing areas of Yunnan Province and screen the field control agents. Collecting blueberry crown gall disease samples from the main blueberry production areas in Yunnan, the symptoms of the disease, colony morphology, pathogenicity test, Biolog analysis and 16S rDNA sequence analysis were carried out for systematic identification. The agent screening test was conducted at the blueberry base with serious disease, and eight kinds of pesticides such as thiazinone and shenzemycin were used for field control experiments. The strain L-11 isolated and purified from blueberry crown gall disease samples could infect sunflower, tomato and blueberry plants, and the symptoms were similar to those in field. The strain with identical morphology was obtained by re-isolation. 16S rDNA sequence analysis and phylogenetic tree analysis showed that the sequence of L-11 strain and Agrobacterium tumefaciens strain Ell-7 (accession number: FJ613554.1) homology was up to 97.65%, and L-11 was on the same branch as A. tumefaciens. The specific fragment of 155 bp was amplified by the ipt specific primer AtP3F/AtP3R in L-11, which further confirmed that blueberry crown gall disease was caused by A. tumefaciens. The field efficacy test results showed that 1.5% thiazinone emulsion in water had a better control effect on blueberry crown gall disease, with a relative control effect of 52%. This is the first report of blueberry crown gall disease caused by A. tumefaciens in Yunnan.

Key words: blueberry crown gall disease, pathogenic bacteria, isolation, identification, Agrobacterium tumefaciens, pharmacy screening

中图分类号:

S436

张荣琴, 万效琰, 张晋豪, 代真林, 郑建立, 崔兴国, 赵项武, 魏兰芳, 姬广海. 云南蓝莓根癌病病原鉴定及其防控药剂的筛选[J]. 中国农学通报, 2021, 37(16): 119-126.

Zhang Rongqin, Wan Xiaoyan, Zhang Jinhao, Dai Zhenlin, Zheng Jianli, Cui Xingguo, Zhao Xiangwu, Wei Lanfang, Ji Guanghai. Pathogen Identification of Blueberry Crown Gall Disease in Yunnan Province and Screening of Control Agents in Field[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2021, 37(16): 119-126.

图/表 11

参考文献 25

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编号	采集地点	编号	采集地点
L4	昆明市石林县	L-11	曲靖市麒麟区
P4	昆明市石林县	L-12	曲靖市麒麟区
P4-12	昆明市石林县	P2-3	曲靖市麒麟区
P4-14	玉溪市澄江县	P2-5	曲靖市麒麟区
P4-1	玉溪市澄江县	P2-6	曲靖市麒麟区
Jh-4	玉溪市澄江县	P2-12	曲靖市麒麟区
P2-13	曲靖市麒麟区	L-3	曲靖市马龙区
P2-14	曲靖市麒麟区	L-5	曲靖市马龙区
P2-1	曲靖市麒麟区	L4-20	曲靖市马龙区
P2-2	曲靖市麒麟区	P4-21	曲靖市马龙区

编号	采集地点	编号	采集地点
L4	昆明市石林县	L-11	曲靖市麒麟区
P4	昆明市石林县	L-12	曲靖市麒麟区
P4-12	昆明市石林县	P2-3	曲靖市麒麟区
P4-14	玉溪市澄江县	P2-5	曲靖市麒麟区
P4-1	玉溪市澄江县	P2-6	曲靖市麒麟区
Jh-4	玉溪市澄江县	P2-12	曲靖市麒麟区
P2-13	曲靖市麒麟区	L-3	曲靖市马龙区
P2-14	曲靖市麒麟区	L-5	曲靖市马龙区
P2-1	曲靖市麒麟区	L4-20	曲靖市马龙区
P2-2	曲靖市麒麟区	P4-21	曲靖市马龙区

编号	1	2	3	4	5	6
A	水	环糊精	糊精	淀粉	吐温 40	吐温80
B	赤藓糖醇	D-果糖	L-海藻糖	D-半乳糖	龙胆二塘	α-D-葡萄糖
C	D-蜜二糖	β-甲基-D-葡萄糖苷	D-阿洛酮糖	D-棉子糖	L-鼠李糖	D-山梨醇
D	乙酸	顺式乌头酸	柠檬酸	蚁酸	D-半乳糖酸内酯	D-半乳糖醛酸
E	p-对羟基苯乙酸	亚甲基丁二酸	α-丁酮酸	α-酮戊二酸	α-氧代戊酸	D,L-乳酸
F	溴丁二酸	琥珀酰胺酸	葡糖醛酰胺	氨基丙酰胺	D-丙氨酸	L-丙氨酸
G	L-组氨酸	羟基-L-脯氨酸	L-亮氨酸	L-鸟氨酸	L-苯丙氨酸	L-脯氨酸
H	尿刊酸	肌苷	尿苷	胸苷	苯乙胺	腐胺
编号	7	8	9	10	11	12
A	N-乙酰-D-氨基半乳糖	N-乙酰-D-氨基葡萄糖	金盏花醇	L-阿拉伯糖	D-阿拉伯醇	2-纤维素二塘
B	肌醇	α-D-乳糖	乳果糖	麦芽糖	D-甘露醇	D-甘露醇
C	蔗糖	D-海藻糖	松二糖	木糖醇	丙酮酸甲酯	单甲琥珀酸
D	D-葡萄糖酸	D-氨基葡萄糖酸	D-葡萄糖醛酸	α-羟丁酸	β-羟丁酸	g-羟丁酸
E	丙二酸	丙酸	奎宁酸	D-砂糖酸	癸二酸	丁二酸
F	L-丙氨酰甘氨酸	L-天门冬酰胺	L-天冬氨酸	L-谷氨酸	甘氨酰-L-天冬氨酸	甘氨酰-L-谷氨酸
G	L-焦谷氨酸	D-丝氨酸	L-丝氨酸	L-苏氨酸	D,L-肉毒碱	g-氨基丁酸
H	2-氨基乙醇	2,3-丁二醇	丙三醇	D,L-α-吲哚甘油磷酸	葡萄糖1-磷酸盐	葡萄糖6-磷酸盐

编号	1	2	3	4	5	6
A	水	环糊精	糊精	淀粉	吐温 40	吐温80
B	赤藓糖醇	D-果糖	L-海藻糖	D-半乳糖	龙胆二塘	α-D-葡萄糖
C	D-蜜二糖	β-甲基-D-葡萄糖苷	D-阿洛酮糖	D-棉子糖	L-鼠李糖	D-山梨醇
D	乙酸	顺式乌头酸	柠檬酸	蚁酸	D-半乳糖酸内酯	D-半乳糖醛酸
E	p-对羟基苯乙酸	亚甲基丁二酸	α-丁酮酸	α-酮戊二酸	α-氧代戊酸	D,L-乳酸
F	溴丁二酸	琥珀酰胺酸	葡糖醛酰胺	氨基丙酰胺	D-丙氨酸	L-丙氨酸
G	L-组氨酸	羟基-L-脯氨酸	L-亮氨酸	L-鸟氨酸	L-苯丙氨酸	L-脯氨酸
H	尿刊酸	肌苷	尿苷	胸苷	苯乙胺	腐胺
编号	7	8	9	10	11	12
A	N-乙酰-D-氨基半乳糖	N-乙酰-D-氨基葡萄糖	金盏花醇	L-阿拉伯糖	D-阿拉伯醇	2-纤维素二塘
B	肌醇	α-D-乳糖	乳果糖	麦芽糖	D-甘露醇	D-甘露醇
C	蔗糖	D-海藻糖	松二糖	木糖醇	丙酮酸甲酯	单甲琥珀酸
D	D-葡萄糖酸	D-氨基葡萄糖酸	D-葡萄糖醛酸	α-羟丁酸	β-羟丁酸	g-羟丁酸
E	丙二酸	丙酸	奎宁酸	D-砂糖酸	癸二酸	丁二酸
F	L-丙氨酰甘氨酸	L-天门冬酰胺	L-天冬氨酸	L-谷氨酸	甘氨酰-L-天冬氨酸	甘氨酰-L-谷氨酸
G	L-焦谷氨酸	D-丝氨酸	L-丝氨酸	L-苏氨酸	D,L-肉毒碱	g-氨基丁酸
H	2-氨基乙醇	2,3-丁二醇	丙三醇	D,L-α-吲哚甘油磷酸	葡萄糖1-磷酸盐	葡萄糖6-磷酸盐

药剂		稀释比例	药剂		稀释比例
化学药剂	50%氯溴异氰尿酸粉剂	1:2000	生物菌剂	枯草芽孢杆菌	1:200
	1.5%噻霉酮水乳剂	1:2000		13-6	1:30
	叶斑宁	1:50		WR13-6	1:10
	1%申嗪霉素悬浮剂	1:1500		C3	1:30

云南蓝莓根癌病病原鉴定及其防控药剂的筛选

Pathogen Identification of Blueberry Crown Gall Disease in Yunnan Province and Screening of Control Agents in Field

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级别	分级标准	代表数值
Ⅰ级	健康	0
Ⅱ级	有1~5个冠瘿瘤植株生长基本正常	1
Ⅲ级	瘤子在5个以上根茎部冠瘿瘤占相应段周面积1/3	2
Ⅳ级	瘤子在较多并愈合成片根茎部冠瘿瘤占相应段周面积1/3	3

编号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	(0)	372	391	374	424	444	457	387	352	352	391	493
B	296	330	469	532	575	573	464	540	506	334	310	384
C	534	307	523	<7>	610	422	603	601	523	376	289	216
D	258	718	<845>	454	797	762	849	573	471	<45>	310	276
E	<306>	(163)	<72>	794	(41)	568	<675>	297	675	<609>	<240>	366
F	281	345	525	<257>	<119>	544	464	861	777	591	452	584
G	635	526	439	589	<519>	607	704	(42)	530	402	319	375
H	526	423	435	574	<387>	<481>	539	430	425	433	397	553

处理	药剂	坐果率/%	发病率/%	病情指数	防效/%
1	50%氯溴异氰尿酸粉剂	53.21ab	51.28g	39.64f	43cd
2	1.5%噻霉酮水乳剂	54.63a	45.85i	33.7i	52a
3	1%申嗪霉素悬浮剂	52.58ab	55.23f	36.17h	48b
4	叶斑宁水剂	48.35b	69.56c	49.88b	29f
5	WR13-6	50.13ab	68.33d	40.24e	42d
6	13-6	48.25b	73.87b	46.53d	33e
7	C3	51.37ab	48.33h	38.64g	45c
8	枯草芽孢杆菌	49.96ab	66.67e	47.28c	32e
9	CK	42.58c	85.53a	69.88a

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