基于HPLC结合多元统计方法分析不同产地覆盆子药材中有机酸的差异

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb2023-0360

摘要/Abstract

摘要：

为了探讨不同产地覆盆子中8种有机酸的差异，建立HPLC同时测定8种有机酸含量的方法，以期为覆盆子的部分酸味物质提供理论依据。以同一采收期的覆盆子药材为研究对象，通过高效液相色谱法(HPLC)建立其8种有机酸组分的定量方法，并结合聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)对其差异进行分析比较。结果表明，有机酸在浓度0.001~2.00 mg/mL范围内线性关系良好，检测限(LOD)为0.326~1.114 μg/mL，定量限(LOQ)为1.060~3.604 μg/mL，加标回收率为97.40%~101.58%，标准偏差RSD为1.23%~2.34%。该方法测定不同产地覆盆子药材中有机酸的含量存在差异，聚类分析和判别分析均能有效将部分产地根据省份进行区分，且判别分析效果更好，最终能聚为7类：浙江、安徽、江苏、福建、江西、四川和湖南。PCA结果表明，草酸、酒石酸、苹果酸、莽草酸、柠檬酸、琥珀酸和乙酸是覆盆子药材中的主要有机酸。研究首次建立了HPLC同时分析覆盆子药材中8种有机酸的含量差异，且产地来源覆盖面广，结果可靠，可用于不同产地覆盆子药材中有机酸类成分的质量评价和初步区分。

关键词: 覆盆子, 不同产地, 多元统计, 有机酸, HPLC

Abstract:

To investigate the differences of eight organic acids in raspberry from different origins, a method for measuring the content of eight organic acids at the same time by HPLC was established, in order to provide a theoretical basis for some sour substances in raspberry. The raspberry herb of the same harvesting period was taken as the research object, the quantitative methods of eight organic acid components were established by HPLC, and the differences were analyzed and compared by cluster analysis (CA), principal component analysis (PCA) and orthogonal partial least squares-discriminant analysis (OPLS-DA). The results showed that the linear relationship of organic acids in the concentration range of 0.001-2.00 mg/mL was good, the limit of detection (LOD) were 0.326~1.114 μg/mL, the limit of quantification (LOQ) were 1.060~3.604 μg/mL, the average recovery rates were 97.40%-101.58%, and the relative standard deviation (RSD) were 1.23%-2.34%. This method determines the content of organic acids in raspberry of different origins, both cluster analysis and OPLS-DA can effectively distinguish some production areas according to provinces, and the effect of OPLS-DA is better than CA, the origins can be clustered into 7 categories according to the province: Zhejiang, Anhui, Jiangsu, Fujian, Jiangxi, Sichuan and Hunan. The PCA results showed that oxalic acid, tartaric acid, malic acid, shikimic acid, citric acid, succinic acid, and acetic acid were the main organic acids in raspberry herbs. HPLC was established to analyze the differences on the content of eight organic acids in raspberry at the first time, and the origins are wide, the results are reliable, which could be used for the quality evaluation and preliminary differentiation of organic acid components in raspberry of different origins.

Key words: raspberry, different origins, multivariate statistics, organic acids, HPLC

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图/表 9

参考文献 26

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编号	产地	批号	编号	产地	批号	编号	产地	批号
1	江西婺源	20210522	11	安徽巢湖	20210520	21	福建南平	20210522
2	江西横峰	20210524	12	浙江千岛湖	20210518	22	福建大田	20210522
3	江西德兴	20210522	13	浙江衢州	20210523	23	福建政和	20210522
4	江西玉山	20210519	14	浙江三门	20210522	24	福建霞浦	20210522
5	安徽亳州	20210520	15	浙江兰溪	20210522	25	四川绵阳	20210520
6	安徽绩溪	20210428	16	浙江文成	20210522	26	四川广元	20210520
7	安徽歙县	20210525	17	浙江台州	20210522	27	江苏江阴	20210524
8	安徽广德	20210521	18	浙江宁波	20210522	28	江苏昆山	20210524
9	安徽泾县	20210521	19	浙江馨昌	20210522	29	广西柳州	20210522
10	安徽黄山	20210521	20	湖南衡阳	20210523	30	广西玉林	20210522

编号	产地	批号	编号	产地	批号	编号	产地	批号
1	江西婺源	20210522	11	安徽巢湖	20210520	21	福建南平	20210522
2	江西横峰	20210524	12	浙江千岛湖	20210518	22	福建大田	20210522
3	江西德兴	20210522	13	浙江衢州	20210523	23	福建政和	20210522
4	江西玉山	20210519	14	浙江三门	20210522	24	福建霞浦	20210522
5	安徽亳州	20210520	15	浙江兰溪	20210522	25	四川绵阳	20210520
6	安徽绩溪	20210428	16	浙江文成	20210522	26	四川广元	20210520
7	安徽歙县	20210525	17	浙江台州	20210522	27	江苏江阴	20210524
8	安徽广德	20210521	18	浙江宁波	20210522	28	江苏昆山	20210524
9	安徽泾县	20210521	19	浙江馨昌	20210522	29	广西柳州	20210522
10	安徽黄山	20210521	20	湖南衡阳	20210523	30	广西玉林	20210522

有机酸组分	保留时间/min	标准曲线	相关系数r	检测限/(μg/mL)	定量限/(μg/mL)
草酸	3.212	y=5000000x-4814.9	0.99995	0.645	2.080
酒石酸	3.546	y=912187x+5323.2	0.99990	1.114	3.604
苹果酸	3.987	y=795565x-5800.1	0.99975	0.326	1.060
莽草酸	4.254	y=20000000x+72306	0.99999	0.579	1.730
柠檬酸	4.699	y=790177x+8447.6	0.99990	0.401	1.209
乙酸	5.616	y=479104x-2922.7	0.99999	0.682	2.060
琥珀酸	5.981	y=464210x+4213.5	0.99985	0.558	1.601
富马酸	8.033	y=9000000x+7577.4	0.99990	0.502	1.500

有机酸组分	保留时间/min	标准曲线	相关系数r	检测限/(μg/mL)	定量限/(μg/mL)
草酸	3.212	y=5000000x-4814.9	0.99995	0.645	2.080
酒石酸	3.546	y=912187x+5323.2	0.99990	1.114	3.604
苹果酸	3.987	y=795565x-5800.1	0.99975	0.326	1.060
莽草酸	4.254	y=20000000x+72306	0.99999	0.579	1.730
柠檬酸	4.699	y=790177x+8447.6	0.99990	0.401	1.209
乙酸	5.616	y=479104x-2922.7	0.99999	0.682	2.060
琥珀酸	5.981	y=464210x+4213.5	0.99985	0.558	1.601
富马酸	8.033	y=9000000x+7577.4	0.99990	0.502	1.500

有机酸组分	2.0 μg/mL		100 μg/mL		1000 μg/mL
有机酸组分	回收率%	S_RSD/%	回收率%	S_RSD/%	回收率%	S_RSD/%
草酸	101.2	1.24	99.01	2.11	98.61	1.68
酒石酸	98.29	1.58	97.59	1.24	99.90	1.33
苹果酸	98.45	1.73	99.64	1.49	98.41	1.28
莽草酸	98.90	1.47	100.81	1.45	101.58	1.23
柠檬酸	99.38	1.62	99.17	1.38	97.4	1.31
乙酸	100.42	1.49	98.74	1.32	101.02	1.43
琥珀酸	99.99	1.95	102.50	1.55	99.90	1.26
富马酸	99.83	2.22	98.26	1.46	100.26	2.34