盐碱地冬枣内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb2022-0988

摘要/Abstract

摘要：

为了研究盐碱地冬枣内生真菌的组成及其抑菌活性，以黄骅冬枣的健康组织为供试材料，采用组织分离、真菌形态学和ITS序列分析的方法，从冬枣不同组织分离到111个菌株，鉴定为19个属共计23种，其中优势菌群为链格孢属(Alternaria)和镰刀菌属(Fusarium)，相对分离频率分别为37.84%和21.62%。冬枣各个组织内生真菌的多样性存在明显差异，枝条内生真菌的Shannon-Weaver指数(H=2.02)远高于花(0.80)。通过平板对峙法筛选出3株对冬枣黑斑病菌(Alternaria tenuissima)和梨轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)具有抑制作用的内生真菌，其中菌株J7-4-4及其发酵液对2种靶标菌的抑菌活性最强。本试验首次研究盐碱地冬枣内生真菌及其抑菌活性，为特殊生长环境下植物内生真菌的研究及开发提供理论依据。

关键词: 冬枣, 盐碱地, 内生真菌, 多样性, 抑菌活性

Abstract:

To investigate the community composition and antibacterial activity of endophytes of Ziziphus jujube in saline-alkali field, the healthy tissues of Z. jujube in Huanghua were used as test materials. Tissue isolation method, morphology and internal transcribed spacer (ITS) sequence analysis were used to obtain 111 endophytes, affiliated with 19 genera and 23 species, among which Alternaria and Fusarium were the dominant genus with the relative isolation frequency of 37.84% and 21.62%. There were significant differences in the diversity of endophytes in various tissues of Z. jujube, and the Shannon Weaver index (H=2.02) of endophytes in branches was much higher than that in flowers (0.80). The three strains of endophytes with antibacterial effect on both Alternaria tenuissima and Botryosphaeria dothidea were found by plate confrontation method, among which the strain J7-4-4 and its products showed higher antibacterial effect on the two target fungi. We studied endophytes and antibacterial activity of Z. jujube in saline-alkali field for the first time, which provided theoretical basis for the study and development of endophytes in plants under special growing environment.

Key words: Ziziphus jujube, saline-alkali field, fungal endophytes, diversity, antibacterial activity

雷早娟, 武亚明, 刘子欢, 安鹏天, 娄巧哲, 窦华云. 盐碱地冬枣内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究[J]. 中国农学通报, 2023, 39(27): 140-148.

LEI Zaojuan, WU Yaming, LIU Zihuan, AN Pengtian, LOU Qiaozhe, DOU Huayun. Endophytes of Ziziphus jujube: Isolation, Identification and Antibacterial Activity in Saline-Alkali Field[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2023, 39(27): 140-148.

图/表 8

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序号	菌株编号	序列号	同源菌株	相似度/%
1	L1-19-9	OP847195	Acremonium sclerotigenum (MH171928.1)	100
2	B1-4-3	OP847196	Alternaria sp. (OP482444.1)	100
3	B1-7-5	OP847197	Alternaria sp. (MT557073.1)	100
4	J1-1-1	OP847198	Botryosphaeria sp. (MN105577.1)	100
5	B1-14-7	OP847199	Cladosporium sinuosum (OP473975.1)	100
6	B1-51-22	OP847200	Cladosporium limoniforme (OP473942.1)	100
7	L6-9-6	OP847201	Fusarium sp. (OP454912.1)	100
8	J7-8-7	OP847202	Fusarium incarnatum (MT563420.1)	100
9	L7-1-1	OP847203	Fusarium equiseti (MT558603.1)	100
10	L1-26-12	OP847204	Gibellulopsis nigrescens (MN982329.1)	100
11	J2-6-6	OP847205	Penicillium oxalicum (MT598830.1)	100
12	B3-1-1	OP847206	Aspergillus tubingensis (OP454491.1)	100
13	B2-31-13	OP847207	Chaetomium globosum ( MT579670.1)	100
14	B1-23-10	OP847208	Diaporthe camporesii (MN535309.1)	100
15	B3-4-4	OP847209	Didymella sp. (MT000602.1)	100
16	B1-1-1	OP847210	Eutypella sp. (MT606214.1)	100
17	B1-53-24	OP847211	Dothiorella viticola (MT587419.1)	100
18	F3-6-4	OP847212	Subramaniula cuniculorum (MN844781.1)	100
19	J2-5-5	OP847213	Torula fici (MG208172.1)	100
20	J5-1-1	OP847214	Talaromyces trachyspermus (MT529043.1)	100
21	J7-4-4	OP847215	Aschersonia sp. (AY225332.1)	100
22	R7-2-2	OP847216	Macrophomina phaseolina (MN555383.1)	100
23	J7-5-20	OP847217	Ceratobasidium sp. (MH819799.1)	100

序号	菌株编号	序列号	同源菌株	相似度/%
1	L1-19-9	OP847195	Acremonium sclerotigenum (MH171928.1)	100
2	B1-4-3	OP847196	Alternaria sp. (OP482444.1)	100
3	B1-7-5	OP847197	Alternaria sp. (MT557073.1)	100
4	J1-1-1	OP847198	Botryosphaeria sp. (MN105577.1)	100
5	B1-14-7	OP847199	Cladosporium sinuosum (OP473975.1)	100
6	B1-51-22	OP847200	Cladosporium limoniforme (OP473942.1)	100
7	L6-9-6	OP847201	Fusarium sp. (OP454912.1)	100
8	J7-8-7	OP847202	Fusarium incarnatum (MT563420.1)	100
9	L7-1-1	OP847203	Fusarium equiseti (MT558603.1)	100
10	L1-26-12	OP847204	Gibellulopsis nigrescens (MN982329.1)	100
11	J2-6-6	OP847205	Penicillium oxalicum (MT598830.1)	100
12	B3-1-1	OP847206	Aspergillus tubingensis (OP454491.1)	100
13	B2-31-13	OP847207	Chaetomium globosum ( MT579670.1)	100
14	B1-23-10	OP847208	Diaporthe camporesii (MN535309.1)	100
15	B3-4-4	OP847209	Didymella sp. (MT000602.1)	100
16	B1-1-1	OP847210	Eutypella sp. (MT606214.1)	100
17	B1-53-24	OP847211	Dothiorella viticola (MT587419.1)	100
18	F3-6-4	OP847212	Subramaniula cuniculorum (MN844781.1)	100
19	J2-5-5	OP847213	Torula fici (MG208172.1)	100
20	J5-1-1	OP847214	Talaromyces trachyspermus (MT529043.1)	100
21	J7-4-4	OP847215	Aschersonia sp. (AY225332.1)	100
22	R7-2-2	OP847216	Macrophomina phaseolina (MN555383.1)	100
23	J7-5-20	OP847217	Ceratobasidium sp. (MH819799.1)	100

真菌类群	相对分离频率(IF)
真菌类群	枝	叶	花	果	根	合计
枝顶孢属Acremonium	2.44	3.23	0.00	0.00	0.00	1.80
链格孢属Alternaria	31.71	48.39	70.00	28.00	0.00	37.84
葡萄座腔菌属Botryosphaeria	0.00	0.00	0.00	4.00	0.00	0.90
枝孢属Cladosporium	4.88	9.68	20.00	4.00	0.00	7.21
镰刀菌属Fusarium	19.51	22.58	0.00	28.00	50.00	21.62
Gibellulopsis属	0.00	3.23	0.00	0.00	0.00	0.90
青霉菌属Penicillium	2.44	0.00	0.00	8.00	0.00	2.70
曲霉属Aspergillus	7.32	0.00	0.00	0.00	25.00	3.60
毛壳菌属Chaetomium	4.88	0.00	0.00	0.00	0.00	1.80
间座壳属Diaporthe	12.20	0.00	0.00	0.00	0.00	4.50
亚隔孢壳属Didymella	9.76	12.90	0.00	8.00	0.00	9.01
弯孢聚壳属Eutypella	2.44	0.00	0.00	0.00	0.00	0.90
小穴壳属Dothiorella	2.44	0.00	0.00	0.00	0.00	0.90
沙氏壳属Subramaniula	0.00	0.00	10.00	0.00	0.00	0.90
色串孢属Torula	0.00	0.00	0.00	4.00	0.00	0.90
黄丝曲霉属Talaromyces	0.00	0.00	0.00	4.00	0.00	0.90
座壳孢菌Aschersonia	0.00	0.00	0.00	4.00	0.00	0.90
大茎点霉属Macrophomina	0.00	0.00	0.00	0.00	25.00	0.90
角担菌属Ceratobasidium	0.00	0.00	0.00	8.00	0.00	1.80
菌株数合计	41	31	10	25	4	111
多样性指数(H)	2.02	1.40	0.80	1.96	1.04	－
丰富度指数(D)	2.69	1.46	0.87	2.80	1.44	－

真菌类群	相对分离频率(IF)
真菌类群	枝	叶	花	果	根	合计
枝顶孢属Acremonium	2.44	3.23	0.00	0.00	0.00	1.80
链格孢属Alternaria	31.71	48.39	70.00	28.00	0.00	37.84
葡萄座腔菌属Botryosphaeria	0.00	0.00	0.00	4.00	0.00	0.90
枝孢属Cladosporium	4.88	9.68	20.00	4.00	0.00	7.21
镰刀菌属Fusarium	19.51	22.58	0.00	28.00	50.00	21.62
Gibellulopsis属	0.00	3.23	0.00	0.00	0.00	0.90
青霉菌属Penicillium	2.44	0.00	0.00	8.00	0.00	2.70
曲霉属Aspergillus	7.32	0.00	0.00	0.00	25.00	3.60
毛壳菌属Chaetomium	4.88	0.00	0.00	0.00	0.00	1.80
间座壳属Diaporthe	12.20	0.00	0.00	0.00	0.00	4.50
亚隔孢壳属Didymella	9.76	12.90	0.00	8.00	0.00	9.01
弯孢聚壳属Eutypella	2.44	0.00	0.00	0.00	0.00	0.90
小穴壳属Dothiorella	2.44	0.00	0.00	0.00	0.00	0.90
沙氏壳属Subramaniula	0.00	0.00	10.00	0.00	0.00	0.90
色串孢属Torula	0.00	0.00	0.00	4.00	0.00	0.90
黄丝曲霉属Talaromyces	0.00	0.00	0.00	4.00	0.00	0.90
座壳孢菌Aschersonia	0.00	0.00	0.00	4.00	0.00	0.90
大茎点霉属Macrophomina	0.00	0.00	0.00	0.00	25.00	0.90
角担菌属Ceratobasidium	0.00	0.00	0.00	8.00	0.00	1.80
菌株数合计	41	31	10	25	4	111
多样性指数(H)	2.02	1.40	0.80	1.96	1.04	－
丰富度指数(D)	2.69	1.46	0.87	2.80	1.44	－

菌株编号	种类		抑菌效果
菌株编号	种类		梨轮纹病菌	冬枣黑斑病菌
L1-19-9	Acremonium sclerotigenum		－	－
B1-4-3	Alternaria sp.		－	－
B1-7-5	Alternaria sp.		－	－
J1-1-1		Botryosphaeria sp.	－	－
B1-14-7		Cladosporium sinuosum	－	－
B1-51-22		Cladosporium limoniforme	－	－
L6-9-6		Fusarium sp.	－	－
J7-8-7		Fusarium incarnatum	++	++
L7-1-1		Fusarium equiseti	++	+
L1-26-12		Gibellulopsis nigrescens	－	－
J2-6-6		Penicillium oxalicum	－	－
B3-1-1		Aspergillus tubingensis	－	－
B2-31-13		Chaetomium globosum	－	－
B1-23-10		Diaporthe camporesii	－	－
B3-4-4		Didymella sp.	－	－
B1-1-1		Eutypella sp.	－	－
B1-53-24		Dothiorella viticola	－	－
F3-6-4		Subramaniula cuniculorum	－	－
J2-5-5		Torula fici	－	－
J5-1-1		Talaromyces trachyspermus	－	－
J7-4-4		Aschersonia sp.	+++	+++
R7-2-2		Macrophomina phaseolina	－	－
J7-5-20		Ceratobasidium sp.	－	－