马铃薯A病毒RT-LAMP检测方法的建立

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.2014-2360

中国农学通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (11): 143-147.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.2014-2360

所属专题：马铃薯

马铃薯A病毒RT-LAMP检测方法的建立

刘洪义

黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心

收稿日期:2014-08-29 修回日期:2015-03-19 接受日期:2015-02-16 出版日期:2015-05-06 发布日期:2015-05-06
通讯作者: 刘洪义
基金资助:
国家质检总局科技计划项目 “环介导等温扩增技术(LAMP)检测马铃薯病毒方法的研究” (2013IK274)。

Development of a RT-LAMP assay for rapid detection of Potato virus A

Received:2014-08-29 Revised:2015-03-19 Accepted:2015-02-16 Online:2015-05-06 Published:2015-05-06

摘要/Abstract

摘要： 马铃薯A病毒(potatovirusA，PVA)是一种侵染马铃薯的病毒，严重影响马铃薯的经济价值和产量，为有效防止该有害生物的传入和扩散，建立马铃薯A病毒RT-LAMP检测方法，根据PVA的外壳蛋白基因序列设计RT-LAMP反应的特异引物，通过实验成功建立了PVA的RT-LAMP特异性检测方法。该方法检测快速，36min即可检测到扩增曲线；特异性强，可有效区分同样侵染马铃薯的马铃薯A病毒(PVA)、马铃薯V病毒(PVV)、马铃薯Y病毒(PVY)以及同属的百合斑驳病毒(LMoV)；灵敏度高，比普通RT-PCR灵敏度高10倍；并可通过肉眼观察浊度或颜色反应直接进行结果判断。该方法适用于现场PVA的快速检测。

关键词: 筛选, 筛选

Abstract: Potato virus A (PVA) is a kind of quarantine pest which can infect potato and cause the losses of yield and value of potato. In order to prevent the pest from entry and spreading, the one step loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) method for the detection of potato virus A (PVA) was developed. Using primer explorer software, RT-LAMP primers were designed originally using a conserved region in the coat protein coding region of PVA. The amplification curve result on specificity using PVA, PVV, PVY, LMoV, negative control and water as template showed that the assay could amplify PVA specifically, which was same the fluorescent detection reagent (FDR) reaction result. The sensitivity comparison showed that the RT-LAMP was 10 times more sensitive than conventional reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) using serial dilutions of total RNA extracts. The method can be used to detect PVA rapidly on site.

刘洪义. 马铃薯A病毒RT-LAMP检测方法的建立[J]. 中国农学通报, 2015, 31(11): 143-147.

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