盐胁迫下耐盐甜菜生理及其蛋白差异表达分析

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb2020-0041

中国农学通报 ›› 2020, Vol. 36 ›› Issue (32): 8-16.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb2020-0041

所属专题：生物技术；园艺

盐胁迫下耐盐甜菜生理及其蛋白差异表达分析

文章¹(), 耿贵¹, 王宇光¹, 孙菲², 王皙玮¹, 於丽华¹()

¹黑龙江省普通高校甜菜遗传育种重点试验室/现代农业生态与环境学院,黑龙江大学,哈尔滨 150080
²北海道大学,日本札幌 060-0808

收稿日期:2020-04-25 修回日期:2020-06-09 出版日期:2020-11-15 发布日期:2020-11-19
通讯作者: 於丽华
作者简介:文章,女,1997年出生,贵州遵义人,本科在读,研究方向:农业资源与环境。通信地址:150080 黑龙江省哈尔滨市南岗区学府路74号黑龙江大学,E-mail: 1309592486@qq.com。
基金资助:
国家甜菜农业产业技术体系项目“甜菜种植制度”(CARS-210301);黑龙江省教育厅高校基本科研业务费专项资金项目“甜菜根系适应盐胁迫特有解剖结构变化的研究”(KJCX201919);黑龙江大学省级大学生创新创业训练计划项目“盐胁迫条件下盐敏感与耐盐甜菜根系显微结构差异的研究”(201910212186)

The Physiological and Proteomics Analysis of Salt-resistance Sugar Beet Under Salt Stress

Wen Zhang¹(), Geng Gui¹, Wang Yuguang¹, Sun Fei², Wang Xiwei¹, Yu Lihua¹()

¹Key Laboratory of Sugar Beet Genetic Breeding of Heilongjiang Province/College of Advanced Agriculture and Ecological Environment, Heilongjiang University, Harbin 150080
²Hokkaido University, Sapporo Japan 060-0808

Received:2020-04-25 Revised:2020-06-09 Online:2020-11-15 Published:2020-11-19
Contact: Yu Lihua

摘要/Abstract

摘要：

为了探究甜菜在盐胁迫条件下生长及蛋白差异表达的变化,本研究以耐盐甜菜‘T510’为试验材料,采用室内营养液培养的方式,分析了0、140、280 mmol/L NaCl胁迫条件下甜菜生理和蛋白组变化。结果表明:随着盐分浓度的升高,甜菜的干物质、胁迫指数、叶绿素含量明显降低。相反,丙二醛和可溶性蛋白含量明显升高。利用双向电泳分别在对照组、低盐组(140 mmol/L NaCl)、高盐组(280 mmol/L NaCl)中检测到514、579、562个蛋白点。在低盐-对照、高盐-对照和低盐-高盐中分别有17、40、21个差异表达蛋白（变化倍数>2,P<0.05）。通过质谱分析最终分别鉴定出12、23、11个差异表达蛋白。这些差异蛋白主要参与光合作用和物质代谢。同时,发现磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶家族蛋白PEPC,Zn结合脱氢酶家族蛋白亚型1和ATP合酶的γ链在响应盐胁迫过程中表达量变化较大。因此,对于耐盐甜菜来说,盐胁迫主要影响与光合作用和物质代谢相关的蛋白表达,其中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶家族蛋白PEPC、Zn结合脱氢酶家族蛋白亚型1和ATP合酶的γ链的作用明显。以上这些发现为甜菜及其他作物的耐盐育种提供有价值的理论依据。

关键词: 盐胁迫, 甜菜, 生理生化, 双向电泳

Abstract:

The aim is to explore the growth and proteomics difference of sugar beet under salt stress. In hydroponics indoor, the salt tolerant beet‘T510’was used as the experimental material, and the differences of physiological index and proteome of sugar beet were analyzed in the nutrition solution with 0, 140 and 280 mmol/L NaCl stress. The results showed that the dry matter, stress index and chlorophyll content significantly decreased along with the increase of salt concentration. In contrast, the content of malondialdehyde and soluble protein were significantly increased. A total of 514, 579 and 562 proteins were detected in the control, low salt treatment (140 mmol/L NaCl) and high salt treatment (280 mmol/L NaCl), respectively. There were 17, 40 and 21 significantly changed proteins (fold change > 2 and P value < 0.05) found between control vs. low salt treatment, control vs. high salt stress and low salt treatment vs. high salt treatment, respectively. By mass spectrometry, 12, 23 and 11 differential expression proteins were successfully identified. These proteins were mainly involved in photosynthesis and material metabolism. In addition, we found the abundance of PEPC, Zn-binding dehydrogenase family protein isoform 1 and ATP synthase gamma chain had a high level of fold change in response to salt stress. Therefore, for salt tolerant sugar beet, salt stress mainly affects the protein expression related to photosynthesis and material metabolism, in which PEPC, Zn binding dehydrogenase family protein subtype 1 and γ chain of ATPase play an important role. These results could present a theoretical basis for salt tolerance breeding of sugar beet and other crops.

Key words: salt stress, sugar beet, physiology and biochemistry, dimensional electrophoresis

中图分类号:

S566.301

文章, 耿贵, 王宇光, 孙菲, 王皙玮, 於丽华. 盐胁迫下耐盐甜菜生理及其蛋白差异表达分析[J]. 中国农学通报, 2020, 36(32): 8-16.

Wen Zhang, Geng Gui, Wang Yuguang, Sun Fei, Wang Xiwei, Yu Lihua. The Physiological and Proteomics Analysis of Salt-resistance Sugar Beet Under Salt Stress[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2020, 36(32): 8-16.

图/表 11

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处理间对比	能量代谢相关蛋白	物质代谢相关蛋白	光合作用相关蛋白	蛋白质修饰加工相关蛋白	防御与胁迫相关蛋白	转录相关蛋白	未知蛋白
低盐-对照	0	25	41.66	0	16.67	16.67	0
高盐-对照	8.70	26.09	30.43	4.35	17.39	8.7	4.35
高盐-低盐	9.09	0	36.36	9.09	18.18	18.18	9.09

处理间对比	能量代谢相关蛋白	物质代谢相关蛋白	光合作用相关蛋白	蛋白质修饰加工相关蛋白	防御与胁迫相关蛋白	转录相关蛋白	未知蛋白
低盐-对照	0	25	41.66	0	16.67	16.67	0
高盐-对照	8.70	26.09	30.43	4.35	17.39	8.7	4.35
高盐-低盐	9.09	0	36.36	9.09	18.18	18.18	9.09

功能	标号及蛋白名称			蛋白所在比对组	Mascot 得分			覆盖度		变化倍数		P
能量代谢	10. ATP合酶δ链 * ATP synthase delta chain			高盐-对照	72			4%		1.66		0.004
	10. ATP合酶δ链 * ATP synthase delta chain			高盐-低盐	72			4%		1.66		0.004
	24. ATP合酶γ链ATP synthase gamma chain			高盐-对照	279			11%		4.29		0.032
物质代谢	126. 3-异丙基苹果酸脱氢酶3-isopropylmalate dehydrogenase			低盐-对照	103			6%		-2.42		0.001
	127. 二氨基庚二酸异构酶Diaminopimelate epimerase			低盐-对照	196			15%		-3.25		0.001
	128. 丙二酸单酰CoA-ACP转酰基酶Malonyl-CoA-acyl carrier protein transacylase			低盐-对照	302			11%		-2.60		0.002
	12. α-1,4-葡聚糖-蛋白质合酶α-1,4-glucan-protein synthase			高盐-对照	298			13%		1.51		0.012
	22. S-腺苷甲硫氨酸合成酶1 S-adenosylmethionine synthase 1			高盐-对照	831			25%		2.03		0.001
	23. UDP-D-芹菜糖酶/UDP-D-木糖酶合酶1 UDP-D-apiose/UDP-D-xylose synthase 1			高盐-对照	462			18%		1.50		0.026
	27. 胆碱单加氧酶Choline monooxygenase			高盐-对照	1118			33%		1.89		0.020
	28. Zn结合脱氢酶家族蛋白亚型1 Zn-binding dehydrogenase family protein isoform 1			高盐-对照	141			7%		1.58		0.025
	30. Zn结合脱氢酶家族蛋白亚型1 Zn-binding dehydrogenase family protein isoform 1			高盐-对照	231			4%		4.54		0.007
光合作用	3. 放氧增强蛋白1 Oxygen-evolving enhancer protein 1, chloroplastic			高盐-对照	376			19%		-2.28		0.002
	7. 光系统II稳定性/装配因子HCF136 Photosystem II stability/assembly factor HCF136			高盐-对照	180			11%		-2.06		0.009
	8. 光系统II放氧复合体蛋白23kDa polypeptide of the oxygen evolving complex of photosystem II			高盐-对照	153			10%		-3.97		0.006
	11. PsbP结构域蛋白3 psbP domain-containing protein 3			低盐-对照	54			4%		-2.01		0.013
	11. PsbP结构域蛋白3 psbP domain-containing protein 3			高盐-对照	54			4%		-2.07		0.002
	31. 晶体结构的光合A2B2-甘油醛-3-磷酸脱氢酶复合NADP Crystal Structure Of The Photosynthetic A2b2-Glyceraldehyde-3- Phosphate Dehydrogenase			低盐-对照	254			8%		2.10		0.005
				高盐-对照	254			8%		2.41		0.008
	32. 铁氧还原蛋白-NADP还原酶Ferredoxin--NADP reductase			低盐-对照	500			20%		1.71		0.036
	32. 铁氧还原蛋白-NADP还原酶Ferredoxin--NADP reductase			高盐-对照	500			20%		3.23		0.006
	33. 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶家族蛋白PEPC * Phosphoenolpyruvate carboxylase family protein			低盐-对照	121			3%		2.64		0.003
				高盐-对照	121			3%		2.64		0.003
				高盐-低盐	121			3%		1.84		0.009
	37.核酮糖-1,5 - 二磷酸羧化酶/加氧酶Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase activase			高盐-低盐	162			8%		3.17		0.003
	44. 吡哆醇合成蛋白ER1 Pyridoxin biosynthesis protein ER1			高盐-低盐	109			9%		1.64		0.045
	47. 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶家族蛋白PEPC *Phosphoenolpyruvate carboxylase family protein			高盐-低盐	137			3%		1.94		0.017
	130. 核酮糖二磷酸羧化酶 RuBP* Ribulose bisphosphate carboxylase large chain			低盐-对照	133			4%		-1.73		0.036
修饰加工	肽脯氨酰顺反异构酶Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase			高盐-对照	254			11%		-1.73		0.003
修饰加工	42. 蛋白质二硫键异构酶 Protein disulfide isomerase			高盐-低盐	115			6%		1.78		0.005
防御与胁迫		14. harpin结合蛋白1 Harpin binding protein 1	高盐-对照			166	8%		-1.89		0.002
		17. 铜-锌超氧化物歧化酶 Copper-zinc superoxide dismutase	低盐-对照			451	35%		-3.31		0.005
		17. 铜-锌超氧化物歧化酶 Copper-zinc superoxide dismutase	高盐-对照			451	35%		-1.73		0.001
		19. 抗坏血酸过氧化物酶 Ascorbate peroxidase	高盐-对照			393	25%		1.66		0.005
		29. H-5型硫氧还原蛋白 Thioredoxin H-type 5	低盐-对照			108	8%		1.90		0.001
		29. H-5型硫氧还原蛋白 Thioredoxin H-type 5	高盐-对照			108	8%		1.61		0.007
		43. 抗坏血酸过氧化物酶 Ascorbate peroxidase 2	高盐-低盐			212	20%		1.62		0.017
		45. L-抗坏血酸过氧化物酶前体 Stromal L-ascorbate peroxidase precursor	高盐-低盐			361	11%		2.18		0.004
转录		15. 核糖核蛋白 * Ribonucleoprotein, chloroplast	高盐-对照			91	8%		-1.55		0.013
		21. 伸长因子tu Elongation factor Tu, chloroplastic	低盐-对照			568	12%		1.68		0.004
			高盐-对照			568	12%		2.40		0.015
		46. 基本转录因子3亚型1 Basic transcription factor 3 isoform 1	低盐-对照			264	13%		-2.81		0.004
			高盐-低盐			264	13%		2.82		0.001
		48. GTP结合核蛋白Ran/TC4 GTP-binding nuclear protein Ran/TC4	高盐-低盐			388	27%		1.80		0.018
未知蛋白		25. predicted protein	高盐-对照			128	8%		-1.55		0.004
未知蛋白		41. unknown	高盐-低盐			344	12%		1.87		0.001

功能	标号及蛋白名称			蛋白所在比对组	Mascot 得分			覆盖度		变化倍数		P
能量代谢	10. ATP合酶δ链 * ATP synthase delta chain			高盐-对照	72			4%		1.66		0.004
	10. ATP合酶δ链 * ATP synthase delta chain			高盐-低盐	72			4%		1.66		0.004
	24. ATP合酶γ链ATP synthase gamma chain			高盐-对照	279			11%		4.29		0.032
物质代谢	126. 3-异丙基苹果酸脱氢酶3-isopropylmalate dehydrogenase			低盐-对照	103			6%		-2.42		0.001
	127. 二氨基庚二酸异构酶Diaminopimelate epimerase			低盐-对照	196			15%		-3.25		0.001
	128. 丙二酸单酰CoA-ACP转酰基酶Malonyl-CoA-acyl carrier protein transacylase			低盐-对照	302			11%		-2.60		0.002
	12. α-1,4-葡聚糖-蛋白质合酶α-1,4-glucan-protein synthase			高盐-对照	298			13%		1.51		0.012
	22. S-腺苷甲硫氨酸合成酶1 S-adenosylmethionine synthase 1			高盐-对照	831			25%		2.03		0.001
	23. UDP-D-芹菜糖酶/UDP-D-木糖酶合酶1 UDP-D-apiose/UDP-D-xylose synthase 1			高盐-对照	462			18%		1.50		0.026
	27. 胆碱单加氧酶Choline monooxygenase			高盐-对照	1118			33%		1.89		0.020
	28. Zn结合脱氢酶家族蛋白亚型1 Zn-binding dehydrogenase family protein isoform 1			高盐-对照	141			7%		1.58		0.025
	30. Zn结合脱氢酶家族蛋白亚型1 Zn-binding dehydrogenase family protein isoform 1			高盐-对照	231			4%		4.54		0.007
光合作用	3. 放氧增强蛋白1 Oxygen-evolving enhancer protein 1, chloroplastic			高盐-对照	376			19%		-2.28		0.002
	7. 光系统II稳定性/装配因子HCF136 Photosystem II stability/assembly factor HCF136			高盐-对照	180			11%		-2.06		0.009
	8. 光系统II放氧复合体蛋白23kDa polypeptide of the oxygen evolving complex of photosystem II			高盐-对照	153			10%		-3.97		0.006
	11. PsbP结构域蛋白3 psbP domain-containing protein 3			低盐-对照	54			4%		-2.01		0.013
	11. PsbP结构域蛋白3 psbP domain-containing protein 3			高盐-对照	54			4%		-2.07		0.002
	31. 晶体结构的光合A2B2-甘油醛-3-磷酸脱氢酶复合NADP Crystal Structure Of The Photosynthetic A2b2-Glyceraldehyde-3- Phosphate Dehydrogenase			低盐-对照	254			8%		2.10		0.005
				高盐-对照	254			8%		2.41		0.008
	32. 铁氧还原蛋白-NADP还原酶Ferredoxin--NADP reductase			低盐-对照	500			20%		1.71		0.036
	32. 铁氧还原蛋白-NADP还原酶Ferredoxin--NADP reductase			高盐-对照	500			20%		3.23		0.006
	33. 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶家族蛋白PEPC * Phosphoenolpyruvate carboxylase family protein			低盐-对照	121			3%		2.64		0.003
				高盐-对照	121			3%		2.64		0.003
				高盐-低盐	121			3%		1.84		0.009
	37.核酮糖-1,5 - 二磷酸羧化酶/加氧酶Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase activase			高盐-低盐	162			8%		3.17		0.003
	44. 吡哆醇合成蛋白ER1 Pyridoxin biosynthesis protein ER1			高盐-低盐	109			9%		1.64		0.045
	47. 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶家族蛋白PEPC *Phosphoenolpyruvate carboxylase family protein			高盐-低盐	137			3%		1.94		0.017
	130. 核酮糖二磷酸羧化酶 RuBP* Ribulose bisphosphate carboxylase large chain			低盐-对照	133			4%		-1.73		0.036
修饰加工	肽脯氨酰顺反异构酶Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase			高盐-对照	254			11%		-1.73		0.003
修饰加工	42. 蛋白质二硫键异构酶 Protein disulfide isomerase			高盐-低盐	115			6%		1.78		0.005
防御与胁迫		14. harpin结合蛋白1 Harpin binding protein 1	高盐-对照			166	8%		-1.89		0.002
		17. 铜-锌超氧化物歧化酶 Copper-zinc superoxide dismutase	低盐-对照			451	35%		-3.31		0.005
		17. 铜-锌超氧化物歧化酶 Copper-zinc superoxide dismutase	高盐-对照			451	35%		-1.73		0.001
		19. 抗坏血酸过氧化物酶 Ascorbate peroxidase	高盐-对照			393	25%		1.66		0.005
		29. H-5型硫氧还原蛋白 Thioredoxin H-type 5	低盐-对照			108	8%		1.90		0.001
		29. H-5型硫氧还原蛋白 Thioredoxin H-type 5	高盐-对照			108	8%		1.61		0.007
		43. 抗坏血酸过氧化物酶 Ascorbate peroxidase 2	高盐-低盐			212	20%		1.62		0.017
		45. L-抗坏血酸过氧化物酶前体 Stromal L-ascorbate peroxidase precursor	高盐-低盐			361	11%		2.18		0.004
转录		15. 核糖核蛋白 * Ribonucleoprotein, chloroplast	高盐-对照			91	8%		-1.55		0.013
		21. 伸长因子tu Elongation factor Tu, chloroplastic	低盐-对照			568	12%		1.68		0.004
			高盐-对照			568	12%		2.40		0.015
		46. 基本转录因子3亚型1 Basic transcription factor 3 isoform 1	低盐-对照			264	13%		-2.81		0.004
			高盐-低盐			264	13%		2.82		0.001
		48. GTP结合核蛋白Ran/TC4 GTP-binding nuclear protein Ran/TC4	高盐-低盐			388	27%		1.80		0.018
未知蛋白		25. predicted protein	高盐-对照			128	8%		-1.55		0.004
未知蛋白		41. unknown	高盐-低盐			344	12%		1.87		0.001

盐胁迫下耐盐甜菜生理及其蛋白差异表达分析

The Physiological and Proteomics Analysis of Salt-resistance Sugar Beet Under Salt Stress

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