鱼腥草叶斑病及茎斑病病原菌的分离与鉴定

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb2023-0314

中国农学通报 ›› 2024, Vol. 40 ›› Issue (12): 119-125.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb2023-0314

所属专题：植物保护

鱼腥草叶斑病及茎斑病病原菌的分离与鉴定

张重梅¹(), 谢杰¹, 张蕾¹, 杨潇湘¹, 黄小琴¹, 邓越¹, 胡孜进¹, 余垚颖¹, 鲜赟曦¹, 马凡², 刘勇¹()

¹ 四川省农业科学院植物保护研究所，农业农村部西南作物有害生物综合治理重点实验室，成都 610066
² 武胜县农业农村局，四川武胜 638400

收稿日期:2023-04-27 修回日期:2023-07-15 出版日期:2024-04-25 发布日期:2024-04-22
通讯作者:
刘勇，男，1964年出生，重庆潼南人，研究员，博士，主要从事植物病理学研究。通信地址：610066 四川省成都市锦江区静居寺20号四川省农业科学院植物保护研究所，Tel：028-84504089，E-mail：liuyongdr@163.com。
作者简介:
张重梅，女，1983年出生，湖北鹤峰人，助理研究员，硕士，主要从事植物病害及生物防治研究。通信地址：610066 四川省成都市锦江区静居寺路20号四川省农业科学院植物保护研究所，Tel：028-84504089，E-mail：zhongmeizhang12@163.com。

The Pathogen Causing Leaf and Stem Spot of Houttuynia cordata: Isolation and Identification

ZHANG Zhongmei¹(), XIE Jie¹, ZHANG Lei¹, YANG Xiaoxiang¹, HUANG Xiaoqin¹, DENG Yue¹, HU Zijin¹, YU Yaoying¹, XIAN Yunxi¹, MA Fan², LIU Yong¹()

¹ Institute of Plant Protection, Sichuan Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Integrated Pest Management in Southwest Agriculture Crops, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Chengdu 610066
² Agriculture and Rural Bureau of Wusheng County, Wusheng, Sichuan 638400

Received:2023-04-27 Revised:2023-07-15 Published:2024-04-25 Online:2024-04-22

摘要/Abstract

摘要：

为了明确引起四川省广汉市鱼腥草新型叶斑及茎斑类病害的病原菌种类，为该病的科学防治提供理论依据，对采自广汉市的鱼腥草病茎叶通过组织消毒分离、离体接种、形态学观察与基于核糖体转录间隔区(ITS)、延长因子(tef1)、钙调蛋白(cal)和组蛋白(his3)基因的分子鉴定进行病原菌的分离鉴定。结果表明，病原菌菌丝呈灰白色到浅褐色，其分生孢子器可产生纺锤形到椭圆形的α型分生孢子以及丝状或钩状β型分生孢子。多基因联合系统发育分析表明，病原菌在大豆间座壳(Diaporthe sojae)和菜豆间座壳(D. phaseolorum)分枝外单独聚为一枝，并且3枝一起聚为一个大枝，因此建议成立一个新种—鱼腥草间座壳(D. houttuynia)来容纳此类病菌。结合形态学和分子鉴定结果，将引起广汉市鱼腥草新型叶斑及茎斑类病害的病原菌鉴定为鱼腥草间座壳(D. houttuynia)。

关键词: 鱼腥草, 叶斑病, 茎斑病, 分离鉴定, 鱼腥草间座壳

Abstract:

To identify the pathogen species causing a noval desease of leaf spot and stem spot of Houttuynia cordata Thunb. in Guanghan City, Sichuan Province, and provides theoretical basis for the scientific management of this disease, the leaves and stems of diseased H. cordata were collected from Guanghan City, and the pathogen was isolated and identified by tissue isolation, pathogenicity testing, morphological characterization, and molecular identification based on ITS, tef1, cal and his3 gene sequences. The results indicate that the mycelium of the pathogen is gray-white to light brown. The conidiomata, which are produced in the late growth stage, can produce two types of conidia: fusiform to oval-shaped α-type conidia and filamentous or hook-shaped β-type conidia. Multiple gene cluster analysis showed that the pathogen formed an individual branch adjacent to the Diaporthe Sojae and D. phaseolorum branches, and formed a big branch with these two branches in the phylogenetic tree, and a new species named D. houttuynia was suggested to establish to accommodate this pathogen. According to morphology and molecular identification, the pathogen causing the noval desease of leaf spot and stem spot of H. cordata in Guanghan City was identified as D. houttuynia.

Key words: Houttuynia cordata, leaf spot, stem spot, isolation and identification, Diaporthe houttuynia

张重梅, 谢杰, 张蕾, 杨潇湘, 黄小琴, 邓越, 胡孜进, 余垚颖, 鲜赟曦, 马凡, 刘勇. 鱼腥草叶斑病及茎斑病病原菌的分离与鉴定[J]. 中国农学通报, 2024, 40(12): 119-125.

ZHANG Zhongmei, XIE Jie, ZHANG Lei, YANG Xiaoxiang, HUANG Xiaoqin, DENG Yue, HU Zijin, YU Yaoying, XIAN Yunxi, MA Fan, LIU Yong. The Pathogen Causing Leaf and Stem Spot of Houttuynia cordata: Isolation and Identification[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2024, 40(12): 119-125.

图/表 5

扩增区域	引物名称	引物序列(5'-3')
5.8S nrRNA gene with the two flanking internal transcribed spacers (ITS)	ITS1	TCCGTAGGTGAACCTGCGG^[14]
	ITS4	TCCTCCGCTTATTGATATGC^[14]
Translation elongation factor 1-alpha gene (tef1)	EF1	ATGGGTAAGGARGACAAGAC^[15]
	EF2	GGARGTACCAGTSATCATGTT^[15]
Calmodulin gene (cal)	CAL-228F	GAGTTCAAGGAGGCCTTCTCCC^[16]
	CAL-737R	CATCTTTCTGGCCATCATGG^[16]
Histone H3 gene (his3)	CYLH3F	AGGTCCACTGGTGGCAAG^[17]
	H3-1b	GCGGGCGAGCTGGATGTCCTT^[18]

表1. 本研究所用引物

菌株名称	ITS	tef1-1	cal	his3
D. sojae strain YLX5	OM538412	OM654848	OM643268	OM654820
D. sojae strain YLX75	OM538415	OM654851	OM643273	OM654823
D. sojae strain YLX81	OM538416	OM654849	OM643271	OM654821
D. phaseolorum strain CBS 116019	KC343175	KC343901	KC343417	KC343659
D. phaseolorum strain LGMF927	KC343179	KC343905	KC343421	KC343663
D. phaseolorum isolate EFA 462	MH050431	MH051280	MH051292	MH025967
D. miriciae strain CGMHD 1023	MH268404	MH368012	MH368011	MH368010
D. miriciae strain BRIP 55662c	KJ197283	KJ197245
D. masirevicii strain BRIP 54256	KJ197277	KJ197238
D. masirevicii strain BRIP 54120a	KJ197281	KJ197243
D. ueckerae isolate SLHX3	KY565424	KY569391
D. ueckerae isolate SLHX11	KY565425	KY569389
D. subellipicola strain KUMCC 17-0153	MG746632	MG746633
Fusarium solani strain MRC 2565	MH582400	MH582420

表2. 系统发育树中所用序列的登录号

图1. 鱼腥草叶斑病及茎斑病危害症状 a.叶片划伤接种菌株GHY1-1后叶片正面的发病情况（7 dpi；左上角为病斑局部放大图），b.叶片划伤接种GHY1-1后叶片背面的发病情况（7 dpi；左上角为病斑局部放大图），c.茎秆划伤接种菌株GHY1-1后的发病情况(7 dpi)，d.叶片划伤接种菌株GHY1-2后叶片正面的发病情况（7 dpi；左上角为病斑局部放大图），e.叶片划伤接种菌株GHY1-2后叶片背面的发病情况（7 dpi；左上角为病斑局部放大图），f.茎秆划伤接种菌株GHY1-2后的发病情况(7 dpi)，g-h.鱼腥草叶斑及茎斑病田间危害症状

图2. 鱼腥草叶斑病菌及茎斑病菌形态特征 a-d.菌株GHY1-1 和GHY1-2在PDA上的菌落形态(25℃，5 dpi)，e.菌株GHY1-1在苜蓿杆上形成大量分生孢子器，f.成熟的分生孢子器，g.正在释放分生孢子的分生孢子器，h.α型和β型分生孢子，i.β型分生孢子。标尺：g=200 μm；h-i=10 μm

图3. 菌株GHY1-1和GHY1-2的系统发育进化树 a.基于ITS序列构建的系统发育树，b.基于tef1序列构建的系统发育树，c.基于ITS序列以及tef1、cal和his3基因序列聚合构建的系统发育树。本试验分离的菌株GHY1-1和GHY1-2用红色加粗字体标注，大豆间座壳(D. sojae)用黑色加粗字体标注，菜豆间座壳(D. phaseolorum)用蓝色加粗字体标注，左下方的标尺用以表示遗传距离

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