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中国农学通报 ›› 2010, Vol. 26 ›› Issue (21): 432-435.

所属专题： 水产渔业

• 水产 渔业 • 上一篇    下一篇

克氏原螯虾ISSR体系优化

杨帆 胡小虎 刁英 邓凤娇 胡中立 舒新亚   

  • 收稿日期:2010-04-07 修回日期:2010-10-08 出版日期:2010-11-05 发布日期:2010-11-05
  • 基金资助:

    克氏原螯虾高效无公害生产关键技术研究与示范

Optimization of ISSR-PCR System in Procambarus clarkii

  • Received:2010-04-07 Revised:2010-10-08 Online:2010-11-05 Published:2010-11-05

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摘要：

为了获得最佳的克氏原螯虾ISSR-PCR 反应体系，采用单因素实验法将反应体系的Taq 聚合酶、 dNTPs和Mg2+ 3 个主要因素设定5 个梯度，根据每个因素量的变化对扩增结果产生的影响进行了研究，最后确定最佳反应体系为：总体积10 μL，1 μL 10×Taq Buffer、dNTPs 浓度0.6 mmol/L、0.6 U Taq DNA polymerase、MgCl2浓度1.8 mmol/L、20 ng DNA，引物浓度0.8 μmol/L。

关键词: 阜平大枣, 阜平大枣, 无芽茎段, 离体培养

Abstract:

For optimizing ISSR-PCR reaction system of Procambarus clarkii, the single factor experiment included three factors, such as Taq DNA polymerse, dNTPs and Mg2+, to five different concentrations were set to study the effect of these variations in ISSR-PCR amplification in this research. In conclusion the reaction system was optimized as below：1 ?L 10xTaq Buffer, 0．6 mmol/L dNTPs，0.6 U Taq DNA polymerase, 1.8 mmol/L MgCl2, 20 ng DNA，0.8 ?mol／L primer and with total 10 ?L reaction solution．