Establishment of in Vitro Regeneration System of ‘Shuang Feng No.1’ Common Bean (Phaseolus vulgaris)

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb2024-0140

Abstract

Abstract:

Common bean (Phaseolus vulgaris) is an important legume vegetable, and its in vitro regeneration is difficult, which limits the efficiency of genetic transformation and molecular breeding. In order to establish an efficient and stable in vitro regeneration system of common bean, this study used ‘Shuangfeng No.1’ common bean as material, cotyledonary nodes, hypocotyls, true leaves and cotyledons as explants, and used direct regeneration (callus pathway) and indirect regeneration (cotyledonary nodes directly bud) to optimize the ratio of plant growth regulators, low temperature and high osmotic stress conditions. The optimal parameters of callus induction, embryogenic callus differentiation, adventitious bud formation and rooting transplanting were systematically screened, and the in vitro regeneration system of common bean was established. The results showed that: (1) the best explants for loose callus induction were hypocotyls and cotyledonary nodes. The best medium was MS+ 1 mg/L 2,4-D, and the induction rates were 93.33% and 90.00%, respectively. (2) The optimal medium for inducing embryogenic callus in common bean（Phaseolus vulgaris）was MS+ 0.5 mg/L 2,4-D+ 0.25 mg/L 6-BA. Embryogenic callus was more easily induced when the explants were cultured at low temperature for 2 to 5 days. However, successful regeneration through callus was not achieved in this experiment, and further research is needed. (3) The indirect regeneration experiment indicated that the best explant was the cotyledon node, and the optimal induction medium was MS+ 2 mg/L 6-BA, with an adventitious bud induction rate of 100%. (4) The induced adventitious buds could be transferred to 1/2 MS+ 1 mg/L IBA rooting medium to regenerate complete plants. The rooting rate was 96.67%, the survival rate of transplanted seedlings was 84.16%, and the regenerated plants could flower and pod normally. This experiment established an efficient in vitro regeneration culture system for common bean (Phaseolus vulgaris), enabling rapid propagation of plants in vitro and laying the foundation for the establishment of a genetic transformation system for common bean (Phaseolus vulgaris).

Key words: common bean (Phaseolus vulgaris), loose callus, embryogenic callus, cotyledons regeneration, adventitious buds, plant growth regulators

CLC Number:

S643.1

XU Yingnan, LIU Yanjun, HUANG Junxuan, HAN Qihou, GAO Yizhuo, GU Yu. Establishment of in Vitro Regeneration System of ‘Shuang Feng No.1’ Common Bean (Phaseolus vulgaris)[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2026, 42(10): 52-60.

Figures/Tables 12

References 26

[1]	SCHOONHOVEN A, VOYSEST O. Common beans: Research for crop improvement[M]. UK: Redwood Press Ltd, 1991:7-8.
[2]	党根友. 芸豆栽培品种经济性状及种子贮藏蛋白特性研究[D]. 杨凌: 西北农林科技大学, 2008:3.
[3]	ANGELINI R R, ALLAVENA A. Plant regeneration from immature cotyledon explant culures of bean (P. coccineus L.)[J]. Plant cell tissue and organ culture, 1989, 19:167-174. doi: 10.1007/BF00035816 URL
[4]	韩启厚, 古瑜, 于海龙. 菜豆组织培养及遗传转化研究进展[J]. 中国农学通报, 2013, 29(10):97-101.
[5]	颜启传. 种子检验原理和技术[M]. 杭州: 浙江大学出版社, 2001:197-198.
[6]	何照范. 粮油籽粒品质及其分析技术[M]. 北京: 农业出版社, 1985:290-294
[7]	刘庆昌, 吴国良. 植物细胞组织培养[M]. 北京: 中国农业大学出版社, 2010:1,31.
[8]	董少鸣. 愈伤组织培养实验中几种外植体的选择[J]. 河北民族师范学院学报, 2007, 27(2):62-62.
[9]	贾金生, 司龙亭, 韩贵超, 等. 不同基因型黄瓜离体再生及其影响因素的研究[J]. 河南农业科学, 2008(6):99-102. doi: 10.3969/j.issn.1004-3268.2008.06.028
[10]	王团团, 缑晨星, 夏磊, 等. 黄瓜10个基因型材料外植体内源激素水平及比例对其离体再生的影响[J]. 园艺学报, 2021, 48(9):1731-1742. doi: 10.16420/j.issn.0513-353x.2020-0855
[11]	薛其勤, 李美芹, 吕金浮, 等. 不同基因型优质草莓组织培养快繁研究[J]. 北方园艺, 2014(21):110-113.
[12]	徐东生. 我国草莓脱毒研究进展[J]. 湖北农业科学, 2002(3):43-46.
[13]	阎丽娜, 李霞, 吴丹. 不同类型水稻材料成熟胚组织培养力的比较[J]. 中国农业科学, 2010(6):1127-1135. doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.004
[14]	杨柏云, 杨慧琴, 蔡奇英, 等. 龙牙百合体细胞胚的诱导及植株再生[J]. 南昌大学学报(理科版), 2005, 29(6).
[15]	李文静, 李学强, 贾毛毛, 等. 6-BA、NAA和2,4-D不同配比对荠菜愈伤组织诱导、生长及植株再生的影响[J]. 植物生理学报, 2012, 48(2):141-146.
[16]	史滟滪, 刘艳军, 杨静慧, 等. 花椰菜松散型胚性愈伤组织的诱导[J]. 天津农业科学, 2019, 25(5):9-12.
[17]	许丁帆, 刘艳军, 边一迪, 等. 红掌松散型胚性愈伤组织的诱导[J]. 天津农学院学报, 2021, 28(3):22-25. doi: 10.19640/j.cnki.jtau.2021.03.005
[18]	欧阳欢, 熊遂金, 陈健美, 等. 不同甜橙品种胚性愈伤组织的诱导[J]. 浙江农业科学, 2021, 62(10):2000-2004. doi: 10.16178/j.issn.0528-9017.20211029
[19]	胡根海, 张晓红, 赵元增. 越南紫薯胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎形成[J]. 广东农业科学, 2021, 48(11):25-31.
[20]	樊小宁, 白天宇, 邬洁丽, 等. 连香树体细胞胚发生及植株再生体系建立[J]. 分子植物育种, 2024, 22(4):1179-1185.
[21]	王焕丽, 刘大军, 冯国军, 等. 菜豆再生体系及遗传转化体系研究进展[J]. 中国农学通报, 2019, 35(16):69-76. doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb19010082
[22]	KWAPATA K, SABZIKAR R, STICKLEN M B, et al. In vitro regeneration and morphogenesis studies in common bean[J]. Plant cell tissue and organ culture, 2010, 100:97-105. doi: 10.1007/s11240-009-9624-9 URL
[23]	陈高, 代祥德, 邵景杰, 等. 菜豆子叶节诱导成苗技术初步研究[J]. 江汉大学学报(自然科学版), 2018, 46(4):299-304.
[24]	吴小丽. 菜豆高效离体再生体系的建立[D]. 雅安: 四川农业大学, 2018.
[25]	曾辉. 普通菜豆抗旱新种质资源筛选及其离体再生体系构建[D]. 南阳: 南阳师范学院, 2018.
[26]	DANG W, WEI Z M. High frequency plant regeneration from the cotyledonary node of commonbean[J]. Biologia plantarum, 2009, 53(2):312-316. doi: 10.1007/s10535-009-0056-5 URL

培养基编号	外植体	2,4-D/(mg/L)	愈伤组织诱导率/%	愈伤组织颜色	愈伤组织生长速度
1	下胚轴	0	2.33±0.87	褐色	+
2		0.5	73.33±1.33b	黄白色	++
3		1	93.33±0.67a	白色
4		2	60.00±0.23d	黄褐色
5	子叶节	0	1.33±1.19	褐色	+
6		0.5	80.00±1.32b	白色
7		1	90.00±1.59a	白色
8		2	73.33±1.33c	黄色
9	真叶	0	3.67±1.09	黄褐色	+
10		0.5	63.33±0.91cd	黄绿色	++
11		1	83.33±2.13b	黄绿色
12		2	90.00±0.99a	黄色
13	子叶	0	0.00±0.00	褐色	-
14		0.5	2.33±0.44g	黄褐色	+
15		1	5.56±1.07f	黄褐色	+
16		2	6.67±1.12e	黄色	++

培养基编号	外植体	2,4-D/(mg/L)	愈伤组织诱导率/%	愈伤组织颜色	愈伤组织生长速度
1	下胚轴	0	2.33±0.87	褐色	+
2		0.5	73.33±1.33b	黄白色	++
3		1	93.33±0.67a	白色
4		2	60.00±0.23d	黄褐色
5	子叶节	0	1.33±1.19	褐色	+
6		0.5	80.00±1.32b	白色
7		1	90.00±1.59a	白色
8		2	73.33±1.33c	黄色
9	真叶	0	3.67±1.09	黄褐色	+
10		0.5	63.33±0.91cd	黄绿色	++
11		1	83.33±2.13b	黄绿色
12		2	90.00±0.99a	黄色
13	子叶	0	0.00±0.00	褐色	-
14		0.5	2.33±0.44g	黄褐色	+
15		1	5.56±1.07f	黄褐色	+
16		2	6.67±1.12e	黄色	++

编号	植物生长调节剂/(mg/L)		愈伤组织增殖速度	愈伤组织结构及质地	愈伤组织颜色	愈伤组织胚性化程度
编号	2,4-D	6-BA	愈伤组织增殖速度	愈伤组织结构及质地	愈伤组织颜色	愈伤组织胚性化程度
CK	0	0	-+	紧密、硬	黄褐色	非胚性
1	0.1	0.25	-+	紧密、较硬	黄绿色	非胚性
2	0.25	0.1	+	松散、较软	白色	非胚性
3	0.25	0.25	+	紧密、硬	黄色	非胚性
4	0.5	0.1	++	松软、较软	白色	非胚性
5	0.5	0.25	-+	松散，较硬	黄绿色	部分胚性
6	0.5	0.5	-+	紧密、较硬	黄绿色	非胚性
7	0.5	1	-+	紧密、较硬	绿色	非胚性
8	0.75	0.1	++	松散、较软	白色	非胚性
9	0.75	0.25	+	松散、软	白色	非胚性
10	0.75	0.5	-+	紧密、硬	黄白色	部分胚性
11	1	0.1	++	松软、稀软	黄白色	非胚性
12	1	0.25	+	松软、较软	黄白色	非胚性
13	1	0.5	+	松散、较硬	黄绿色	部分胚性

编号	植物生长调节剂/(mg/L)		愈伤组织增殖速度	愈伤组织结构及质地	愈伤组织颜色	愈伤组织胚性化程度
编号	2,4-D	6-BA	愈伤组织增殖速度	愈伤组织结构及质地	愈伤组织颜色	愈伤组织胚性化程度
CK	0	0	-+	紧密、硬	黄褐色	非胚性
1	0.1	0.25	-+	紧密、较硬	黄绿色	非胚性
2	0.25	0.1	+	松散、较软	白色	非胚性
3	0.25	0.25	+	紧密、硬	黄色	非胚性
4	0.5	0.1	++	松软、较软	白色	非胚性
5	0.5	0.25	-+	松散，较硬	黄绿色	部分胚性
6	0.5	0.5	-+	紧密、较硬	黄绿色	非胚性
7	0.5	1	-+	紧密、较硬	绿色	非胚性
8	0.75	0.1	++	松散、较软	白色	非胚性
9	0.75	0.25	+	松散、软	白色	非胚性
10	0.75	0.5	-+	紧密、硬	黄白色	部分胚性
11	1	0.1	++	松软、稀软	黄白色	非胚性
12	1	0.25	+	松软、较软	黄白色	非胚性
13	1	0.5	+	松散、较硬	黄绿色	部分胚性

温度℃	蔗糖g/L	愈伤组织增殖速度	愈伤组织颜色及质地	愈伤组织颜色	愈伤组织胚性化程度
4	30	-+	结构松散、质地硬	黄白色	部分胚性
25	45	+	结构紧密、质地较硬	黄白色	非胚性
25	60	++	结构松散、质地较硬	黄色	部分胚性
25	90	+	结构松散、质地较硬	黄色	部分胚性
25	120	-+	结构紧密、质地较硬	褐色	非胚性