棉花HSP70基因植物表达载体的构建及转化烟草的研究

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb15070103

中国农学通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (31): 194-198.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb15070103

所属专题：生物技术；棉花；烟草种植与生产

棉花HSP70基因植物表达载体的构建及转化烟草的研究

刘娜,曲延英,陈全家,倪志勇

新疆农业大学农学院新疆农业大学农业生物技术重点实验室,新疆农业大学农学院新疆农业大学农业生物技术重点实验室,新疆农业大学农学院新疆农业大学农业生物技术重点实验室,新疆农业大学农学院新疆农业大学农业生物技术重点实验室

收稿日期:2015-07-18 修回日期:2015-10-08 接受日期:2015-08-10 出版日期:2015-11-16 发布日期:2015-11-16
通讯作者: 倪志勇
基金资助:
：国家自然科学基金地区科学基金项目“小麦非生物胁迫相关MYB转录因子TaSIM 的功能及分子机理研究”(31360264)；新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目“棉花干旱胁迫相关Hsp70 基因的克隆及功能分析”(2014211A025)、“棉花抗逆相关MYB 转录因子的功能分析”(2013211B19)；棉花生物学国家重点实验室开放课题“棉纤维品质相关MYB转录因子的功能分析”(CB2015A26)；新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划“棉纤维发育相关基因表达分析及鉴定、挖掘与利用研究”(201411103)。

Research on Plant Expression Vector Construction and Transformation to Nicotiana tabacum of Cotton HSP70 Gene

Received:2015-07-18 Revised:2015-10-08 Accepted:2015-08-10 Online:2015-11-16 Published:2015-11-16

摘要/Abstract

摘要： 为研究棉花HSP70 基因在转基因植物中抗旱效果，利用前期克隆的GhHSP70 基因，以pCAMBIA1304 质粒为植物表达载体，构建了GhHSP70 基因的植物表达载体CAMBIA1304-HSP70；采用冻融法转入根癌农杆菌EHA105 菌株，通过叶盘法对模式植物烟草进行遗传转化研究。结果表明，在潮霉素(50 mg/L)选择压力下获得的烟草转化不定芽和完整植株，经过PCR方法以及GUS基因组织化学法检测鉴定转基因烟草，其中有5 株为阳性植株。初步证实了GhHSP70 基因已导入烟草基因组中。为进一步研究该基因的功能提供实验基础，同时为后续转化棉花改善其抗旱能力奠定基础。

关键词: 百合, 百合, 未授粉成熟雌蕊, 转录组, 高通量测序

Abstract: In order to study the response of cotton HSP70 gene to drought stress in transgenic plants, the pCAMBIA1304-HSP70, plant expression vector, was constructed by using the cloned GhHSP70 gene and the pCAMBIA1304 vector. The pCAMBIA1304- HSP70 was transformed into EHA105 strain by freeze- thaw method. Then, the genetic transformation of tobacco was studied through leaf dish transformation method. Results showed that the tobacco adventitious buds and complete plants were obtained under Hygromycin (50 mg/L) selective pressure, the transgenic tobaccos were detected by GUS gene histochemical method and PCR method, and five of them were positive plants. We preliminarily confirmed that the GhHSP70 gene had transferred into tobacco genome. This study provided a fundamental experiment condition for further research on the GhHSP70 gene, and it might lay the foundation for genetic transformation in order to improve the drought resistance of cotton.

刘娜,曲延英,陈全家,倪志勇. 棉花HSP70基因植物表达载体的构建及转化烟草的研究[J]. 中国农学通报, 2015, 31(31): 194-198.

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Research on Plant Expression Vector Construction and Transformation to Nicotiana tabacum of Cotton HSP70 Gene

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