中国农学通报 ›› 2011, Vol. 27 ›› Issue (26): 60-64.
孙丹丹
摘要:
目的:通过流式细胞术观察拯救CIAV M突变株对宿主细胞MSB1的生长周期及凋亡的影响。方法:拯救CIAV M突变株接于MDCC-MSB1细胞系(试验组),并相应设立阴性组(正常SPF鸡肝脏细胞液),阳性组(CUX-1标准毒株),进行培养24hr-48hr。用PI及FITC Annexin V染色方法,用流式细胞仪测定宿主细胞生长周期及凋亡,并用SPSS13.0进行结果统计学分析。结果:接种拯救CIAV M突变株的宿主细胞G0/G1期的累积细胞百分率为59.33%±4.04%,S期为32.92%±3.65%,G2/M期为7.75%±3.11%,与阴性组相比,G0/G1期细胞累积百分率有所上升;与CUX组相比,G0/G1期有所下降,但结果经统计学分析,差异均不显著(P>0.05)。试验组宿主细胞凋亡率为37.00%±4.65%,与阴性组相比,凋亡率上升,统计学差异显著(P<0.05);与阳性组相比,凋亡率下降,统计学差异显著(P<0.05)。结论:本次试验结果显示,经过VP3基因突变的CIAV M突变株,经过病毒拯救并回归本动物后,对宿主细胞MSB1的生长周期没有显著的抑制,但能引起宿主细胞的显著性凋亡,且凋亡程度与CUX-1引起的宿主细胞凋亡率相比有所降低。可以表明,通过VP3密码子移位的基因突变,能够将CIAV的致凋亡作用降低,从而相应降低病毒的致病性,为以后构建CIAV减毒疫苗株奠定理论基础。