一种抗草甘膦转基因油菜的快速鉴定方法

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb20191000746

摘要/Abstract

摘要：

为建立一种快速鉴定抗草甘膦转基因油菜的方法,以抗草甘膦转基因油菜品系及后代分离群体为研究材料,利用不同草甘膦浓度滤纸平板进行种子发芽,观察抗性材料和非抗性材料幼胚抗性反应表型,并通过PCR和苗期草甘膦处理进行抗性验证。结果表明,利用0.5~1 g/L的草甘膦溶液处理的抗性材料胚根根毛生长正常,而非抗性材料胚根生长迟缓且光滑无根毛;利用该浓度的处理BC₁和F₂抗性分离群体,幼胚根毛有无性状分离比符合1:1和3:1,幼胚个体的基因组PCR扩增结果与根毛有无呈共分离。通过观察在该浓度草甘膦发芽处理后的幼胚根毛有无,可有效区分抗草甘膦转基因油菜的抗性和非抗性材料。本研究建立的鉴定方法不仅能够对抗草甘膦油菜材料进行快速、准确鉴定,而且能保证材料成活,对抗草甘膦转基因油菜育种和种子纯度鉴定提供技术参考。

关键词: 转基因油菜, 草甘膦, PCR, 草甘膦抗性, 鉴定

Abstract:

The paper aims to establish a rapid method for identifying glyphosate resistant transgenic rapeseed. In this study, glyphosate resistant transgenic lines and their segregating populations were used as research materials. Seed germination was carried out using filter paper plates with different glyphosate concentration to observe the responses of immature embryos of resistant and non-resistant materials. Resistance verification was performed by PCR and seedling glyphosate treatment. The results showed that the radicle root hair growth of the resistant material treated with 0.5-1 g/L glyphosate solution was normal, while the non-resistant material radicle growth was slow and smooth without root hair; using this concentration to treat BC₁ and F₂ segregating population, the isolation ratio of the traits of the young embryos fit 1:1 and 3:1, and the genomic PCR amplification results of the young embryos were co-segregated with the root hairs. The results showed that the resistant and non-resistant materials of glyphosate resistant transgenic rapeseed could be effectively distinguished by observing the presence or absence of immature root hairs after germination treatment of glyphosate at the above concentration. The identification method established in this study can not only identify glyphosate resistant transgenic rapeseed materials quickly and accurately while ensuring the survival of the materials, but also provide technical reference for the breeding and seed purity identification of glyphosate resistant transgenic rapeseed.

Key words: genetically modified rapeseed, glyphosate, PCR, glyphosate resistance, detection

中图分类号:

S565.4

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图/表 8

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材料名称	来源	草甘膦抗性	外源EPSPS基因的有无
SC₄、20A、中双11	湖南省作物研究所	非抗	无
103421-1、103421-2、103426-7、103440-4	湖南省作物研究所	抗	有
ZJ抗	湖南省作物研究所	抗	有:无=1:1
103469-4、103426-6	湖南省作物研究所	抗	有:无=3:1

材料名称	来源	草甘膦抗性	外源EPSPS基因的有无
SC₄、20A、中双11	湖南省作物研究所	非抗	无
103421-1、103421-2、103426-7、103440-4	湖南省作物研究所	抗	有
ZJ抗	湖南省作物研究所	抗	有:无=1:1
103469-4、103426-6	湖南省作物研究所	抗	有:无=3:1

被检测基因	基因来源	引物序列	扩增长度	退火温度/℃	提示
FMV 35S	外源	正向5'-aagcctcaacaaggtcag-3'	196	55	筛选检测抗草甘膦油菜
		反向5'-ctgctcgatgttgacaag-3'	196	55
		正向5'-aagacatccaccgaagactta-3'	210	60
		反向5'-aagacagctcttttccacgtt-3'	210	60
GOX（修饰）	外源	正向5'-gtcttcgtgttgctggaaccgtt-3'	121	60	抗草甘膦油菜
		反向5'-gaactggcaggagcgagagct-3'	121	60
		正向5'-ctcttgtttcgtcgtttcatc-3'	450	55
		反向5'-gaaacccatccacttggagta-3'	450	55
CP4-EPSPS（修饰）	外源	正向5'-gacttgcgtgttcgttcttc-3'	204	55	抗草甘膦油菜
CP4-EPSPS（修饰）	外源	反向5'-aacaccgttgagcttgagac-3'	204	55	抗草甘膦油菜

被检测基因	基因来源	引物序列	扩增长度	退火温度/℃	提示
FMV 35S	外源	正向5'-aagcctcaacaaggtcag-3'	196	55	筛选检测抗草甘膦油菜
		反向5'-ctgctcgatgttgacaag-3'	196	55
		正向5'-aagacatccaccgaagactta-3'	210	60
		反向5'-aagacagctcttttccacgtt-3'	210	60
GOX（修饰）	外源	正向5'-gtcttcgtgttgctggaaccgtt-3'	121	60	抗草甘膦油菜
		反向5'-gaactggcaggagcgagagct-3'	121	60
		正向5'-ctcttgtttcgtcgtttcatc-3'	450	55
		反向5'-gaaacccatccacttggagta-3'	450	55
CP4-EPSPS（修饰）	外源	正向5'-gacttgcgtgttcgttcttc-3'	204	55	抗草甘膦油菜
CP4-EPSPS（修饰）	外源	反向5'-aacaccgttgagcttgagac-3'	204	55	抗草甘膦油菜

供试材料	草甘膦浓度/(g/L)	表现性/颗			χ²
供试材料	草甘膦浓度/(g/L)	发芽总数	抗性	非抗性	χ²
ZJ抗	1	62	30	32	0.145
ZJ抗	0.5	64	33	31	0.141
103469-4	1	64	47	17	0.021
103469-4	0.5	64	50	14	0.188