克氏原螯虾微小杆菌Exiguobacterium profundum的分离鉴定与药敏试验

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb2022-0066

摘要/Abstract

摘要：

为了判断克氏原螯虾(Procambarus clarkii)发病致死的原因，从发病濒死虾肝胰脏中分离出一株优势菌，通过对该菌进行菌落形态观察、革兰氏染色、生理生化鉴定、16srRNA测序分析及进化树构建确认其为微小杆菌Exiguobacterium profundum。通过纸片扩散法测定了该菌株对青霉素G、氨苄西林、头孢氨苄、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、诺氟沙星、复方新诺明等30种抗菌药物的敏感性，结果显示该菌对30种药物均敏感。通过回归感染实验推测其可能参与克氏原螯虾的致病过程。本实验结果为克氏原螯虾E. profundum的病原鉴定和药物诊治提供了一定的参考和理论基础。

关键词: 克氏原螯虾, 微小杆菌Exiguobacterium profundum, 病原鉴定, 16srRNA基因, 药敏试验, 回归感染

Abstract:

To identify the disease and mortality cause of Procambarus clarkii, a dominant strain isolated from hepatopancreas of the dying crayfish was identified as Exiguobacterium profundum by colony morphology observation, Gram staining, physiological and biochemical identification, 16srRNA sequencing analysis and phylogenetic tree construction. The resistance of this strain to 30 kinds of antibacterial drugs, including mycin G, ampicillin, cephalexin, amikacin, gentamicin, kanamycin, norfloxacin, cotrimoxazole and so on, was determined by disc diffusion method, and the results showed that the strain was sensitive to all the 30 kinds of drugs. After the regression infection experiment, it was inferred that the strain might be involved in the pathogenic process of P. clarkii. The current study could provide certain reference and a theoretical basis for the pathogen identification, drug diagnosis and treatment of E. profundum in P. clarkii.

Key words: Procambarus clarkii, Exiguobacterium profundum, pathogen identification, 16srRNA gene, drug susceptibility test, regression infection experiment

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图/表 7

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测定项目	反应结果	测定项目	反应结果
氧化酶	－	硝酸盐还原	＋
过氧化氢酶	＋	蔗糖发酵	＋
硫化氢	－	0% NaCl生长	＋
吲哚	－	3% NaCl生长	＋
V-P	－	6% NaCl生长	＋
甲基红	－	8% NaCl生长	＋
运动性	＋	10% NaCl生长	＋
淀粉水解	－	12% NaCl生长	＋

测定项目	反应结果	测定项目	反应结果
氧化酶	－	硝酸盐还原	＋
过氧化氢酶	＋	蔗糖发酵	＋
硫化氢	－	0% NaCl生长	＋
吲哚	－	3% NaCl生长	＋
V-P	－	6% NaCl生长	＋
甲基红	－	8% NaCl生长	＋
运动性	＋	10% NaCl生长	＋
淀粉水解	－	12% NaCl生长	＋

药物	抑菌圈直径判断标准/mm				药物含量/(μg/disc)	抑菌圈直径/mm	敏感性
药物	耐药R		中介I	敏感S	药物含量/(μg/disc)	抑菌圈直径/mm	敏感性
青霉素G	≤17		18~20	≥21	10U	36±0.71	S
苯唑西林（苯唑青霉素）	≤10		11~12	≥13	1	27.67±0.47	S
氨苄西林	≤13		14~16	≥17	10	34.73±0.52	S
羧苄西林	≤19		20~22	≥23	100	37.5±0.41	S
哌拉西林/他唑巴坦（特治星）	≤17		18~20	≥21	100/10	38	S
头孢氨苄	≤14		15~17	≥18	30	31.33±0.24	S
头孢唑啉	≤14		15~17	≥18	30	32±0.82	S
头孢拉定	≤14		15~17	≥18	30	32±0.71	S
头孢呋辛（头孢肤）肟（西力欣）	≤14		15~22	≥23	30	29	S
头孢他啶	≤14		15~17	≥18	30	25.83±0.24	S
头孢曲松	≤13		14~20	≥21	30	29.33±0.47	S
头孢哌酮	≤15		16~20	≥21	75	34.17±0.24	S
阿米卡星（丁胺卡那）	≤14		15~16	≥17	30	22.67±0.47	S
庆大霉素	≤12		13~14	≥15	10	22±0.82	S
卡那霉素	≤13		14~17	≥18	30	21.67±0.62	S
新霉素	≤12		13~16	≥17	30	21	S
四环素	≤14		15~18	≥19	30	23.5±0.41	S
多西环素	≤12		13~15	≥16	30	25.83±0.62	S
米诺环素(美满霉素)		≤14	15~18	≥19	30	26.33±0.47		S
红霉素		≤13	14~22	≥23	15	21.67±0.24		S
麦迪霉素		≤13	14~17	≥18	30	20.83±0.24		S
诺氟沙星		≤12	13~16	≥17	10	25.67±0.47		S
氧氟沙星		≤12	13~15	≥16	5	28.33±0.24		S
环丙氟哌酸（环丙沙星）		≤15	16~20	≥21	5	28.33±0.47		S
万古霉素		≤14	15~16	≥17	30	18.83±0.24		S
多粘菌素B		≤8	8~11	≥12	300	14.17±0.24		S
复方新诺明		≤14	15~20	≥21	23.75	21		S
痢特灵		≤14	15~16	≥17	300	21.5±0.41		S
氯霉素		≤12	13~17	≥18	30	24.5±0.71		S
克林霉素（氯洁霉素）		≤14	15~20	≥21	2	23.33±0.24		S

药物	抑菌圈直径判断标准/mm				药物含量/(μg/disc)	抑菌圈直径/mm	敏感性
药物	耐药R		中介I	敏感S	药物含量/(μg/disc)	抑菌圈直径/mm	敏感性
青霉素G	≤17		18~20	≥21	10U	36±0.71	S
苯唑西林（苯唑青霉素）	≤10		11~12	≥13	1	27.67±0.47	S
氨苄西林	≤13		14~16	≥17	10	34.73±0.52	S
羧苄西林	≤19		20~22	≥23	100	37.5±0.41	S
哌拉西林/他唑巴坦（特治星）	≤17		18~20	≥21	100/10	38	S
头孢氨苄	≤14		15~17	≥18	30	31.33±0.24	S
头孢唑啉	≤14		15~17	≥18	30	32±0.82	S
头孢拉定	≤14		15~17	≥18	30	32±0.71	S
头孢呋辛（头孢肤）肟（西力欣）	≤14		15~22	≥23	30	29	S
头孢他啶	≤14		15~17	≥18	30	25.83±0.24	S
头孢曲松	≤13		14~20	≥21	30	29.33±0.47	S
头孢哌酮	≤15		16~20	≥21	75	34.17±0.24	S
阿米卡星（丁胺卡那）	≤14		15~16	≥17	30	22.67±0.47	S
庆大霉素	≤12		13~14	≥15	10	22±0.82	S
卡那霉素	≤13		14~17	≥18	30	21.67±0.62	S
新霉素	≤12		13~16	≥17	30	21	S
四环素	≤14		15~18	≥19	30	23.5±0.41	S
多西环素	≤12		13~15	≥16	30	25.83±0.62	S
米诺环素(美满霉素)		≤14	15~18	≥19	30	26.33±0.47		S
红霉素		≤13	14~22	≥23	15	21.67±0.24		S
麦迪霉素		≤13	14~17	≥18	30	20.83±0.24		S
诺氟沙星		≤12	13~16	≥17	10	25.67±0.47		S
氧氟沙星		≤12	13~15	≥16	5	28.33±0.24		S
环丙氟哌酸（环丙沙星）		≤15	16~20	≥21	5	28.33±0.47		S
万古霉素		≤14	15~16	≥17	30	18.83±0.24		S
多粘菌素B		≤8	8~11	≥12	300	14.17±0.24		S
复方新诺明		≤14	15~20	≥21	23.75	21		S
痢特灵		≤14	15~16	≥17	300	21.5±0.41		S
氯霉素		≤12	13~17	≥18	30	24.5±0.71		S
克林霉素（氯洁霉素）		≤14	15~20	≥21	2	23.33±0.24		S

组别	感染浓度/(cfu/mL)	感染后不同时间死亡数							死亡率/%
组别	感染浓度/(cfu/mL)	1 d	2 d	3 d	4 d	5 d	6 d	7 d	死亡率/%
阴性对照	0	0	1	0	0	1	0	0	10
1	1.808×10⁸	0	1	0	0	1	0	1	15
2	1.808×10⁷	0	0	0	1	1	0	0	10
3	1.808×10⁵	0	0	1	0	1	0	0	10
4	1.808×10³	0	1	3	1	0	0	2	35
5	1.808×10¹	0	0	0	0	1	0	1	10