丹参根腐病病原菌及其生防菌的筛选

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb2023-0735

中国农学通报 ›› 2024, Vol. 40 ›› Issue (30): 119-127.doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.casb2023-0735

丹参根腐病病原菌及其生防菌的筛选

袁梦蕾¹(), 崔明悦¹, 张子通¹, 刘亚钰¹, 刘方春², 马海林², 刘幸红², 燕丽萍²()

¹ 山东沃恩生物科技有限公司，济南 250014
² 山东省林业科学研究院，济南 250014

收稿日期:2023-11-08 修回日期:2024-01-16 出版日期:2024-10-25 发布日期:2024-10-23
通讯作者:
燕丽萍，女，1980年出生，甘肃定西人，正高级工程师，博士，主要从事林草遗传育种研究。通信地址：250131 山东省济南市历城区工业北路163号林科院苗圃中试基地，Tel：0531-86095877，E-mail：ylp_982@163.com。
作者简介:
袁梦蕾，女，1995年出生，山东菏泽人，硕士，研究方向：生物防治。通信地址：250131 山东省济南市历城区工业北路163号林科院苗圃中试基地，Tel：0531-86095877，E-mail：yuanmenglei666@163.com。
基金资助:
济南市科技型中小企业创新能力提升工程“丹参高亲和型微生物菌剂研发及示范”; 泰山学者青年专家奖励计划

Root Rot Pathogens of Salvia miltiorrhiza and Screening of Biocontrol Bacteria

YUAN Menglei¹(), CUI Mingyue¹, ZHANG Zitong¹, LIU Yayu¹, LIU Fangchun², MA Hailin², LIU Xinghong², YAN Liping²()

¹ Shandong Woen Biotechnology Corporation, Jinan 250014
² Shandong Academy of Forestry, Jinan 250014

Received:2023-11-08 Revised:2024-01-16 Published:2024-10-25 Online:2024-10-23

摘要/Abstract

摘要：

本研究旨在筛选用于丹参根腐病防治的生物防治菌株。实验以山东省日照市、临沂市、泰安市发病的丹参及健康丹参的根际土为试材。采用组织分离法从发病丹参中分离病原菌，采用稀释涂布法和平板对峙法从根际土中筛选生防菌，利用形态学和16S rRNA进行鉴定，并在离体丹参上进行防效验证。结果表明，从发病丹参上分离出的病原菌RBT-2-1为木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)，从根际土中筛选出的生防菌i为绿针假单胞菌橙色亚种(Pseudomonas chlororaphis subsp. aurantiaca)。i对TBG-2-1的抑菌率为66.67%，i在离体丹参上对TBG-2-1的防治效果预防组均高于治疗组，且预防组中追加i菌液的防效最好，为44.45%，比预防组中未追加i菌液的处理提高了1.6倍，比治疗组提高了7.0倍。由此可知，i的接种顺序及使用次数会影响对TBG-2-1的防效。本研究为后期大田试验提供参考依据。

关键词: 丹参根腐病, 木贼镰刀菌, 绿针假单胞菌橙色亚种, 生防菌, 平板对峙法, 防治效果, 接种顺序, 使用次数

Abstract:

To screen the biocontrol bacteria of Salvia miltiorrhiza root rot, the infected S. miltiorrhiza and rhizosphere soil from healthy S. miltiorrhiza in Rizhao, Linyi, and Tai'an cities of Shandong Province were used as test materials. The tissue separation method was used to isolate the root rot pathogen from infected S. miltiorrhiza. The gradient dilution plate method and disk diffusion method were used to screen biocontrol bacteria from rhizosphere soil. Identification was achieved through the use of morphological characteristics and 16S rRNA, and control effect testing was carried out on the detached S. miltiorrhiza. The results showed that the pathogen RBT-2-1 isolated from infected S. miltiorrhiza was Fusarium equiseti, and the biocontrol bacterium i screened from rhizosphere soil was Pseudomonas chloriraphis subsp. aurantiaca. The antibacterial rate of i against TBG-2-1 was 66.67%. The control effect of i against TBG-2-1 on the detached S. miltiorrhiza in the prevention group was higher than in the treatment group. Furthermore, the addition of i in the prevention group resulted in the best control effect, reaching 44.45%. The prevention group of adding i was 1.6 times higher than the prevention group without addition, and 7.0 times higher than the treatment group. It can be concluded that the sequence and frequency of inoculation with i will affect the prevention efficacy of TBG-2-1. This study serves as a guide for future field experiments.

Key words: root rot of Salvia miltiorrhiza, Fusarium equiseti, Pseudomonas chlororaphis subsp. aurantiaca, biocontrol bacterium, disk diffusion method, prevention and control effect, vaccination sequence, usage frequency

袁梦蕾, 崔明悦, 张子通, 刘亚钰, 刘方春, 马海林, 刘幸红, 燕丽萍. 丹参根腐病病原菌及其生防菌的筛选[J]. 中国农学通报, 2024, 40(30): 119-127.

YUAN Menglei, CUI Mingyue, ZHANG Zitong, LIU Yayu, LIU Fangchun, MA Hailin, LIU Xinghong, YAN Liping. Root Rot Pathogens of Salvia miltiorrhiza and Screening of Biocontrol Bacteria[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2024, 40(30): 119-127.

图/表 11

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序号	培养基名称	来源或配方
1	马铃薯葡萄糖琼脂	马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，去离子水1 L
2	PD	马铃薯200 g，葡萄糖20 g，去离子水1 L
3	NA	蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，氯化钠5 g，去离子水1 L
4	LB	蛋白胨10 g，酵母浸粉5 g，氯化钠5 g，去离子水1 L
5	固氮菌用阿须贝氏、无机磷细菌筛选、硅酸盐细菌、CAS检测	购买于青岛高科技工业园海博生物技术有限公司
6	无机盐淀粉琼脂	购买于北京索莱宝科技有限公司
7	明胶液化	明胶120 g，氯化钠5 g，蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，去离子水1 L

序号	培养基名称	来源或配方
1	马铃薯葡萄糖琼脂	马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，去离子水1 L
2	PD	马铃薯200 g，葡萄糖20 g，去离子水1 L
3	NA	蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，氯化钠5 g，去离子水1 L
4	LB	蛋白胨10 g，酵母浸粉5 g，氯化钠5 g，去离子水1 L
5	固氮菌用阿须贝氏、无机磷细菌筛选、硅酸盐细菌、CAS检测	购买于青岛高科技工业园海博生物技术有限公司
6	无机盐淀粉琼脂	购买于北京索莱宝科技有限公司
7	明胶液化	明胶120 g，氯化钠5 g，蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，去离子水1 L

菌株	病原菌直径/cm	抑菌带宽度/cm	抑菌率/%
CK	4.56±0.09a	-	-
f	2.01±0.01d	1.16±0.07cd	55.92
g	2.03±0.01d	1.26±0.10bc	55.48
i	1.52±0.02e	1.61±0.09a	66.67
8	2.10±0.03c	1.40±0.03b	53.95
14	2.24±0.04b	1.08±0.1d	50.88

菌株	病原菌直径/cm	抑菌带宽度/cm	抑菌率/%
CK	4.56±0.09a	-	-
f	2.01±0.01d	1.16±0.07cd	55.92
g	2.03±0.01d	1.26±0.10bc	55.48
i	1.52±0.02e	1.61±0.09a	66.67
8	2.10±0.03c	1.40±0.03b	53.95
14	2.24±0.04b	1.08±0.1d	50.88

鉴定指标	i	绿针假单胞菌^[28]
菌体形状	杆状	杆状
菌体大小	0.3~0.8μm×1.0~1.1μm	0.7~0.8μm×1.5~3.6 μm
鞭毛	单极生鞭毛	单个或多个极生
革兰氏反应	-	-
荧光色素	+	+
在4℃生长	+	+
在41℃生长	-	-
最适生长温度	30℃	30℃
固氮	-	ND
溶磷	-	ND
解钾	-	ND
淀粉水解	-	-
产嗜铁素	+	ND
明胶液化	+	+
葡萄糖	+	+
海藻糖	+	+
氨苄青霉素	+	ND
硫酸链霉素	+	ND
氯霉素	+	ND
噻孢霉素	+	ND
奇霉素	+	ND
硫酸卡那霉素	-	ND

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Root Rot Pathogens of Salvia miltiorrhiza and Screening of Biocontrol Bacteria

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处理	发病率/%		病情指数		防治效果/%
处理	14d	40d	14d	40d	14d	40d
对照组	66.67	66.67	46.67	42.86	-	-
i+48 h病（预防）	50.00	83.33	21.43	35.71	54.08	16.68
i+48 h病+追加（预防）	33.33	66.67	22.22	23.81	52.39	44.45
病+48 hi（治疗）	50.00	50.00	35.71	40.48	23.48	5.55
病+48 hi+追加（治疗）	50.00	50.00	30.95	40.48	33.68	5.55

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