Allelopathy Potential and Allelochemicals Identification of Fagopyrum tataricum

doi:10.11924/j.issn.1000-6850.casb2021-0785

Abstract

Abstract:

To explore the allelopathy of aqueous extracts from tartary buckwheat (Fagopyrum tataricum) and its related chemical components, the allelopathic effects of different organic phase extracts from tartary buckwheat plant aqueous extract on seed germination and seedling growth of two noxious farming weeds (Digitaria sanguinalis and Bidens pilosa) were examined by bioassay, and the chemical components of petroleum ether phase and ethyl acetate phase extracts were analyzed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). The results showed that three organic phase extracts (petroleum ether phase, ethyl acetate phase and N-butanol phase) of tartary buckwheat had certain inhibitory effects on the seed germination and seedling growth of D. sanguinalis and B. pilosa. The ethyl acetate phase had the strongest inhibition that the allelopathic response index of two weeds was -1.00 (the suppression rate was 100.0%) at a concentration of 2.00 mg/mL, followed by petroleum ether phase, and the least inhibited was N-butanol phase. Overall, the inhibitory effects of the three organic phase extracts on D. sanguinalis were greater than those on B. pilosa, and the suppressed rate of root length was greater than that of stem length. A total of 41 chemical components with a content higher than 0.5% were identified in petroleum ether phase and ethyl acetate phase extracts of tartary buckwheat, of which, the main component in petroleum ether phase was 4-ethylphenol (accounting for 26.8% of the total content), and the main component in ethyl acetate phase was 2-Isopropyl-5-methyl-1-hexanol (accounting for 20.7% of total content). Our results initially confirm that tartary buckwheat has certain allelopathic effect on farmland weeds and contains some chemical components with bioactivity, but the bioactivity characteristics and mechanism of these chemical components need to be further studied.

Key words: Fagopyrum tataricum, extracts, allelopathic effect, suppression rate, allelopathic response index

CLC Number:

S451.1

Ma Guangzong, Yang Yunhai, Xu Gaofeng, Yang Shaosong, Zhang Fudou, Shen Shicai, Ye Min. Allelopathy Potential and Allelochemicals Identification of Fagopyrum tataricum[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2021, 37(34): 112-120.

Figures/Tables 8

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序号	化合物	保留时间/ min	含量/ %	分子量 (m/z)	主要碎片离子 (m/z)
1	4-乙基苯酚	16.456	26.8	122	107(99.9)、122(36.1)、77(13.0)、108(8.1)、39(5.8)、51(3.7)、91(3.5)、121(3.2)、123(3.1)、65(3.1)
2	2,3-二氢苯并呋喃	18.164	4.0	120	120(99.9)、91(72.8)、119(26.5)、92(18.9)、39(10.0)、89(9.9)、65(9.6)、63(9.6)、121(8.9)、51(6.3)
3	吲哚	20.067	8.2	117	117(99.9)、90(43.3)、89(26.3)、63(9.6)、118(9.3)、116(7.4)、59(6.8)、39(4.2)、62(3.8)、91(3.6)
4	4-甲基吲哚	22.504	9.0	131	130(99.9)、131(76.7)、77(13.5)、103(9.7)、51(7.5)、132(7.3)、102(7.1)、65(5.7)、63(5.7)、50(4.5)
5	2(3H)-Benzofuranone, hexahydro-4,4,7a-trimethyl	25.164	1.6	182	43(99.9)、69(67.0)、41(64.2)、139(62.9)、167(50.6)、55(40.1)、81(37.9)、109(31.9)、96(30.4)、67(25.3)
6	1,2,4a,5,6,8a-Hexahydro-4,7-dimethyl-1- (1-methylethyl)napthtalene	25.251	1.0	204	105(99.9)、41(50.6)、161(50.2)、91(37.0)、93(36.0)、94(28.4)、204(28.3)、81(27.0)、119(26.2)、79(24.8)
7	2,4-二叔丁基苯酚	25.532	0.7	206	191(99.9)、57(32.4)、41(15.8)、206(15.5)、192(14.3)、29(7.5)、74(5.7)、91(5.6)、163(4.9)、39(4.8)
8	二氢猕猴桃内酯	26.041	0.6	180	111(99.9)、43(41.8)、137(35.3)、109(26.8)、180(25.9)、110(18.4)、67(18.1)、124(11.9)、41(10.6)、112(8.5)
9	榄香素	26.548	2.4	208	208(99.9)、193(42.8)209(13.7)、77(9.0)、91(7.1)、177(6.6)、79(6.3)、133(6.3)、118(6.2)、194(6.1)
10	4-(3-hydroxybutyl)-3,5,5- trimethylcyclohex-2-en-1-one	28.639	1.1	210	43(99.9)、41(85.5)、108(78.6)、69(76.6)、135(73.8)、93(72.3)、109(70.5)、95(67.7)、45(67.3)、150(55.1)
11	(1S,4aR,8aR)-7-Isopropylidene-1,4a- dimethyldecahydro-1-naphthalenol	29.038	2.5	222	161(99.9)、204(94.0)、189(72.6)、43(59.6)、41(56.0)、81(50.6)、105(45.2)、135(44.3)、107(41.0)、93(40.7)
12	庚基苯	29.192	1.8	176	91(99.9)、92(89.5)、176(22.7)、41(19.7)、39(16.3)、27(14.4)、29(14.0)、65(12.6)、105(10.9)、43(7.9)
13	(-)-异长叶醇	30.773	1.2	222	109(99.9)、41(95.0)、95(88.5)、81(73.3)、67(61.2)、55(60.1)、69(56.2)、110(55.4)、93(51.7)、79(46.6)
14	2,3-二乙基-5-甲基吡嗪	32.082	4.3	150	41(99.9)、149(77.5)、191(77.4)、43(61.4)、39(56.2)、163(55.8)、91(55.1)、107(45.4)、135(42.2)、77(38.0)
15	1,1,4a-trimethyl-3,4,4a,5,6,7- hexahydronaphthalen-2(1H)-one	32.458	4.0	192	192(99.9)、149(67.5)、177(53.8)、164(30.6)、93(28.7)、41(28.5)、150(25.8)、107(25.3)、91(24.7)、79(23.0)
16	cyclotetradecane	32.811	2.0	196	43(99.9)、55(57.8)、71(40.3)、81(34.5)、69(32.2)、97(31.5)、57(31.0)、67(29.0)、41(28.9)、85(28.4)
17	2-methylhexadecan-1-ol	32.925	0.9	256	57(99.9)、43(88.8)、55(67.0)、41(63.3)、69(58.0)、56(57.2)、71(51.4)、83(46.0)、97(38.6)、70(34.1)
18	5-羟基-6-甲氧基-呋喃并[3,2-g]色烯-7-酮	33.624	9.5	232	41(99.9)、55(43.2)、91(40.6)、69(39.7)、105(39.2)、133(37.7)、39(36.9)、161(34.3)、119(33.4)、43(32.5)
19	邻苯二甲酸二正丁酯	35.213	2.1	278	149(99.9)、57(19.1)、41(14.4)、43(13.9)、55(12.5)、150(9.5)、69(8.2)、104(8.1)、56(7.9)、83(6.5)
20	棕榈酸	35.502	9.0	256	43(99.9)、73(90.5)、60(83.8)、41(74.9)、57(63.4)、55(61.6)、29(41.4)、69(31.0)、71(28.5)、61(21.8)
21	(8R,9S,13S,14S,17S)-13-methyl- 6,7,8,9,11,12,14,15,16,17- decahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-ol	35.741	2.4	256	57(99.9)、73(91.7)、43(84.9)、60(74.0)、71(63.2)、55(57.6)、69(44.4)、41(43.4)、129(43.2)、85(41.0)
22	十五烷酸	35.821	1.3	242	43(99.9)、73(90.5)、60(83.8)、41(74.9)、57(63.4)、55(61.6)、29(41.4)、69(31.0)、71(28.5)、61(21.8)
23	cis-9,10-epoxystearic acid	38.842	0.7	298	55(99.9)、41(74.0)、43(70.0)、69(68.6)、57(63.3)、67(63.3)、155(60.6)、80(50.0)、87(48.0)、82(47.3)
24	正二十七烷	48.371	1.8	380	57(99.9)、43(79.8)、71(62.2)、85(41.6)、55(28.3)、41(27.5)、69(17.6)、99(14.0)、56(13.9)、29(13.5)

序号	化合物	保留时间/ min	含量/ %	分子量 (m/z)	主要碎片离子 (m/z)
1	4-乙基苯酚	16.456	26.8	122	107(99.9)、122(36.1)、77(13.0)、108(8.1)、39(5.8)、51(3.7)、91(3.5)、121(3.2)、123(3.1)、65(3.1)
2	2,3-二氢苯并呋喃	18.164	4.0	120	120(99.9)、91(72.8)、119(26.5)、92(18.9)、39(10.0)、89(9.9)、65(9.6)、63(9.6)、121(8.9)、51(6.3)
3	吲哚	20.067	8.2	117	117(99.9)、90(43.3)、89(26.3)、63(9.6)、118(9.3)、116(7.4)、59(6.8)、39(4.2)、62(3.8)、91(3.6)
4	4-甲基吲哚	22.504	9.0	131	130(99.9)、131(76.7)、77(13.5)、103(9.7)、51(7.5)、132(7.3)、102(7.1)、65(5.7)、63(5.7)、50(4.5)
5	2(3H)-Benzofuranone, hexahydro-4,4,7a-trimethyl	25.164	1.6	182	43(99.9)、69(67.0)、41(64.2)、139(62.9)、167(50.6)、55(40.1)、81(37.9)、109(31.9)、96(30.4)、67(25.3)
6	1,2,4a,5,6,8a-Hexahydro-4,7-dimethyl-1- (1-methylethyl)napthtalene	25.251	1.0	204	105(99.9)、41(50.6)、161(50.2)、91(37.0)、93(36.0)、94(28.4)、204(28.3)、81(27.0)、119(26.2)、79(24.8)
7	2,4-二叔丁基苯酚	25.532	0.7	206	191(99.9)、57(32.4)、41(15.8)、206(15.5)、192(14.3)、29(7.5)、74(5.7)、91(5.6)、163(4.9)、39(4.8)
8	二氢猕猴桃内酯	26.041	0.6	180	111(99.9)、43(41.8)、137(35.3)、109(26.8)、180(25.9)、110(18.4)、67(18.1)、124(11.9)、41(10.6)、112(8.5)
9	榄香素	26.548	2.4	208	208(99.9)、193(42.8)209(13.7)、77(9.0)、91(7.1)、177(6.6)、79(6.3)、133(6.3)、118(6.2)、194(6.1)
10	4-(3-hydroxybutyl)-3,5,5- trimethylcyclohex-2-en-1-one	28.639	1.1	210	43(99.9)、41(85.5)、108(78.6)、69(76.6)、135(73.8)、93(72.3)、109(70.5)、95(67.7)、45(67.3)、150(55.1)
11	(1S,4aR,8aR)-7-Isopropylidene-1,4a- dimethyldecahydro-1-naphthalenol	29.038	2.5	222	161(99.9)、204(94.0)、189(72.6)、43(59.6)、41(56.0)、81(50.6)、105(45.2)、135(44.3)、107(41.0)、93(40.7)
12	庚基苯	29.192	1.8	176	91(99.9)、92(89.5)、176(22.7)、41(19.7)、39(16.3)、27(14.4)、29(14.0)、65(12.6)、105(10.9)、43(7.9)
13	(-)-异长叶醇	30.773	1.2	222	109(99.9)、41(95.0)、95(88.5)、81(73.3)、67(61.2)、55(60.1)、69(56.2)、110(55.4)、93(51.7)、79(46.6)
14	2,3-二乙基-5-甲基吡嗪	32.082	4.3	150	41(99.9)、149(77.5)、191(77.4)、43(61.4)、39(56.2)、163(55.8)、91(55.1)、107(45.4)、135(42.2)、77(38.0)
15	1,1,4a-trimethyl-3,4,4a,5,6,7- hexahydronaphthalen-2(1H)-one	32.458	4.0	192	192(99.9)、149(67.5)、177(53.8)、164(30.6)、93(28.7)、41(28.5)、150(25.8)、107(25.3)、91(24.7)、79(23.0)
16	cyclotetradecane	32.811	2.0	196	43(99.9)、55(57.8)、71(40.3)、81(34.5)、69(32.2)、97(31.5)、57(31.0)、67(29.0)、41(28.9)、85(28.4)
17	2-methylhexadecan-1-ol	32.925	0.9	256	57(99.9)、43(88.8)、55(67.0)、41(63.3)、69(58.0)、56(57.2)、71(51.4)、83(46.0)、97(38.6)、70(34.1)
18	5-羟基-6-甲氧基-呋喃并[3,2-g]色烯-7-酮	33.624	9.5	232	41(99.9)、55(43.2)、91(40.6)、69(39.7)、105(39.2)、133(37.7)、39(36.9)、161(34.3)、119(33.4)、43(32.5)
19	邻苯二甲酸二正丁酯	35.213	2.1	278	149(99.9)、57(19.1)、41(14.4)、43(13.9)、55(12.5)、150(9.5)、69(8.2)、104(8.1)、56(7.9)、83(6.5)
20	棕榈酸	35.502	9.0	256	43(99.9)、73(90.5)、60(83.8)、41(74.9)、57(63.4)、55(61.6)、29(41.4)、69(31.0)、71(28.5)、61(21.8)
21	(8R,9S,13S,14S,17S)-13-methyl- 6,7,8,9,11,12,14,15,16,17- decahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-ol	35.741	2.4	256	57(99.9)、73(91.7)、43(84.9)、60(74.0)、71(63.2)、55(57.6)、69(44.4)、41(43.4)、129(43.2)、85(41.0)
22	十五烷酸	35.821	1.3	242	43(99.9)、73(90.5)、60(83.8)、41(74.9)、57(63.4)、55(61.6)、29(41.4)、69(31.0)、71(28.5)、61(21.8)
23	cis-9,10-epoxystearic acid	38.842	0.7	298	55(99.9)、41(74.0)、43(70.0)、69(68.6)、57(63.3)、67(63.3)、155(60.6)、80(50.0)、87(48.0)、82(47.3)
24	正二十七烷	48.371	1.8	380	57(99.9)、43(79.8)、71(62.2)、85(41.6)、55(28.3)、41(27.5)、69(17.6)、99(14.0)、56(13.9)、29(13.5)

序号	化合物	保留时间/ min	含量/ %	分子量 (m/z)	主要碎片离子 (m/z)
1	异戊酸	8.118	0.8	102	60(99.9)、41(37.4)、43(32.9)、27(25.0)、45(18.1)、39(17.9)、87(15.3)、29(11.5)、42(10.0)、61(6.9)
2	2-甲基丁酸	9.013	7.9	102	74(99.9)、57(63.8)、29(62.1)、41(52.8)、27(32.3)、87(23.8)、45(16.7)、39(16.3)、28(16.1)、73(14.8)
3	偏三甲苯	10.982	5.8	120	105(99.9)、120(59.9)、119(15.2)、77(12.6)、91(9.2)、106(9.1)、51(8.3)、27(6.7)、79(6.2)、121(5.9)
4	异次羊脂酸	11.38	12.0	116	57(99.9)、55(75.4)、41(72.5)、43(67.0)、73(56.5)、74(56.3)、27(52.2)、39(37.1)、60(33.1)、29(31.5)
5	4-乙基苯酚	16.504	8.7	122	107(99.9)、122(36.1)、43(32.9)、77(13.0)、108(8.1)、39(5.8)、51(3.7)、91(3.5)、121(3.2)、123(3.1)
6	四氢熏衣草醇	17.71	20.7	158	71(99.9)、57(99.7)、43(92.5)、55(68.6)、56(63.2)、69(61.9)、41(50.5)、85(46.2)、70(34.0)、84(30.0)
7	2-(羟基甲基)环己酮	17.828	1.6	128	110(99.9)、55(82.7)、67(68.5)、68(67.2)、41(66.7)、57(65.2)、69(51.0)、42(44.0)、82(42.7)、81(35.5)
8	2-丙基-1-庚醇	18.915	0.8	158	43(99.9)、57(69.7)、71(64.5)、41(64.0)、55(53.2)、29(43.9)、85(39.4)、27(36.0)、70(29.1)、56(28.1)
9	苯基丙二酸	19.462	4.0	180	91(99.9)、136(32.1)、44(30.9)、92(19.4)、65(13.7)、39(8.5)、90(6.2)、89(6.0)、63(5.8)、118(5.5)
10	2-甲基-十一烷醇	20.669	3.8	186	57(99.9)、43(89.7)、41(74.4)、56(56.7)、55(52.0)、69(45.8)、71(37.1)、29(36.9)、70(33.5)、83(29.5)
11	(2S)-2-methyl-1-dodecanol	22.927	0.7	200	57(99.9)、41(68.9)、55(56.3)、56(52.5)、29(46.7)、71(45.2)、69(44.4)、31(34.1)、83(31.8)、70(31.4)
12	丁酸癸酯	24.984	4.2	228	71(99.9)、43(96.9)、89(90.9)、41(45.4)、70(44.5)、56(40.8)、55(40.7)、57(38.1)、69(31.3)、83(29.9)
13	dodecyl pentanoate	26.069	1.7	270	57(99.9)、41(99.6)、103(82.2)、43(79.1)、85(74.8)、55(70.1)、29(60.3)、56(41.0)、27(34.6)、69(34.3)
14	己酸酯类癸	28.507	1.8	256	43(99.9)、117(77.8)、41(68.5)、55(54.2)、99(45.7)、29(39.6)、57(37.6)、56(37.6)、70(33.6)、71(31.9)
15	(3E,5E,7E,9Z)-3,7-dimethyl-9-(2,6,6- trimethylcyclohex-2-en-1-ylidene)nona-3,5,7-trien-1-ol	32.518	0.9	286	286(99.9)、85(59.9)、91(56.9)、81(656.9)、105(54.7)、119(54.1)、121(53.8)、40(53.2)、42(42.1)、55(41.8)
16	(Z)-11-Hexadecenoic acid	34.984	2.8	254	55(99.9)、41(84.1)、69(69.1)、43(54.2)、83(43.8)、29(34.2)、28(33.3)、67(32.4)、56(32.4)、97(29.8)
17	棕榈酸	35.35	5.1	256	43(99.9)、73(90.5)、60(83.8)、41(74.9)、57(63.4)、55(61.6)、29(41.4)、69(31.0)、71(28.5)、61(21.8)
18	trichothecolone	38.213	2.9	264	41(99.9)、79(62.8)、43(57.0)、77(51.3)、122(50.4)、39(49.5)、91(46.0)、53(37.1)、133(36.2)、109(35.8)
19	正二十八烷	43.953	11.3	394	57(99.9)、43(82.3)、71(64.7)、85(44.9)、41(33.7)、55(27.4)、99(19.3)、56(17.4)、69(16.8)、29(15.1)

序号	化合物	保留时间/ min	含量/ %	分子量 (m/z)	主要碎片离子 (m/z)
1	异戊酸	8.118	0.8	102	60(99.9)、41(37.4)、43(32.9)、27(25.0)、45(18.1)、39(17.9)、87(15.3)、29(11.5)、42(10.0)、61(6.9)
2	2-甲基丁酸	9.013	7.9	102	74(99.9)、57(63.8)、29(62.1)、41(52.8)、27(32.3)、87(23.8)、45(16.7)、39(16.3)、28(16.1)、73(14.8)
3	偏三甲苯	10.982	5.8	120	105(99.9)、120(59.9)、119(15.2)、77(12.6)、91(9.2)、106(9.1)、51(8.3)、27(6.7)、79(6.2)、121(5.9)
4	异次羊脂酸	11.38	12.0	116	57(99.9)、55(75.4)、41(72.5)、43(67.0)、73(56.5)、74(56.3)、27(52.2)、39(37.1)、60(33.1)、29(31.5)
5	4-乙基苯酚	16.504	8.7	122	107(99.9)、122(36.1)、43(32.9)、77(13.0)、108(8.1)、39(5.8)、51(3.7)、91(3.5)、121(3.2)、123(3.1)
6	四氢熏衣草醇	17.71	20.7	158	71(99.9)、57(99.7)、43(92.5)、55(68.6)、56(63.2)、69(61.9)、41(50.5)、85(46.2)、70(34.0)、84(30.0)
7	2-(羟基甲基)环己酮	17.828	1.6	128	110(99.9)、55(82.7)、67(68.5)、68(67.2)、41(66.7)、57(65.2)、69(51.0)、42(44.0)、82(42.7)、81(35.5)
8	2-丙基-1-庚醇	18.915	0.8	158	43(99.9)、57(69.7)、71(64.5)、41(64.0)、55(53.2)、29(43.9)、85(39.4)、27(36.0)、70(29.1)、56(28.1)
9	苯基丙二酸	19.462	4.0	180	91(99.9)、136(32.1)、44(30.9)、92(19.4)、65(13.7)、39(8.5)、90(6.2)、89(6.0)、63(5.8)、118(5.5)
10	2-甲基-十一烷醇	20.669	3.8	186	57(99.9)、43(89.7)、41(74.4)、56(56.7)、55(52.0)、69(45.8)、71(37.1)、29(36.9)、70(33.5)、83(29.5)
11	(2S)-2-methyl-1-dodecanol	22.927	0.7	200	57(99.9)、41(68.9)、55(56.3)、56(52.5)、29(46.7)、71(45.2)、69(44.4)、31(34.1)、83(31.8)、70(31.4)
12	丁酸癸酯	24.984	4.2	228	71(99.9)、43(96.9)、89(90.9)、41(45.4)、70(44.5)、56(40.8)、55(40.7)、57(38.1)、69(31.3)、83(29.9)
13	dodecyl pentanoate	26.069	1.7	270	57(99.9)、41(99.6)、103(82.2)、43(79.1)、85(74.8)、55(70.1)、29(60.3)、56(41.0)、27(34.6)、69(34.3)
14	己酸酯类癸	28.507	1.8	256	43(99.9)、117(77.8)、41(68.5)、55(54.2)、99(45.7)、29(39.6)、57(37.6)、56(37.6)、70(33.6)、71(31.9)
15	(3E,5E,7E,9Z)-3,7-dimethyl-9-(2,6,6- trimethylcyclohex-2-en-1-ylidene)nona-3,5,7-trien-1-ol	32.518	0.9	286	286(99.9)、85(59.9)、91(56.9)、81(656.9)、105(54.7)、119(54.1)、121(53.8)、40(53.2)、42(42.1)、55(41.8)
16	(Z)-11-Hexadecenoic acid	34.984	2.8	254	55(99.9)、41(84.1)、69(69.1)、43(54.2)、83(43.8)、29(34.2)、28(33.3)、67(32.4)、56(32.4)、97(29.8)
17	棕榈酸	35.35	5.1	256	43(99.9)、73(90.5)、60(83.8)、41(74.9)、57(63.4)、55(61.6)、29(41.4)、69(31.0)、71(28.5)、61(21.8)
18	trichothecolone	38.213	2.9	264	41(99.9)、79(62.8)、43(57.0)、77(51.3)、122(50.4)、39(49.5)、91(46.0)、53(37.1)、133(36.2)、109(35.8)
19	正二十八烷	43.953	11.3	394	57(99.9)、43(82.3)、71(64.7)、85(44.9)、41(33.7)、55(27.4)、99(19.3)、56(17.4)、69(16.8)、29(15.1)

萃取物	处理浓度/(mg/mL)	萌发率/%		化感响应指数
萃取物	处理浓度/(mg/mL)	马唐	三叶鬼针草	马唐	三叶鬼针草
石油醚相	0.00	100.00±0.00a	96.67±3.33a	—	—
	0.25	83.33±3.33b	80.00±5.77ab	-0.17±0.03a	-0.17±0.06a
	0.50	76.67±6.67b	60.00±5.77bc	-0.23±0.07a	-0.38±0.06ab
	1.00	43.33±8.82c	60.00±11.55bc	-0.57±0.09b	-0.38±0.12ab
	2.00	20.00±5.77d	40.00±5.77c	-0.80±0.06c	-0.59±0.06b
乙酸乙酯相	0.00	90.00±5.77a	100.00±0.00a	—	—
	0.25	90.00±5.77a	66.67±3.33b	0.00±0.06a	-0.33±0.03ab
	0.50	76.67±6.67a	76.67±3.33b	-0.15±0.07a	-0.23±0.03a
	1.00	13.33±6.67b	46.67±12.02c	-0.85±0.07b	-0.53±0.12b
	2.00	0.00±0.00b	0.00±0.00d	-1.00±0.00b	-1.00±0.00c
正丁醇相	0.00	96.67±3.33a	93.33±6.67a	—	—
	0.25	80.00±15.28ab	63.33±6.67b	-0.17±0.16a	-0.32±0.07a
	0.50	80.00±10.00ab	80.00±5.77ab	-0.17±0.10a	-0.14±0.06a
	1.00	53.33±3.33bc	66.67±8.82b	-0.45±0.03ab	-0.29±0.09a
	2.00	36.67±3.33c	66.67±8.82b	-0.62±0.03b	-0.29±0.09a